碧云天生产的Exonuclease T，即核酸外切酶T，也称RNase T，是一种从大肠杆菌中表达纯化获得的能够特异催化单链DNA或RNA从3'-5'方向降解的核酸外切酶[1]。Exonuclease T常用于单链DNA/RNA的消化，或将带有3'突出末端的双链DNA或双链RNA生成平末端[2]。

Exonuclease T对单链RNA和单链DNA 3'端外切酶的催化活性不同，对于单链DNA的活性要高很多。在标准反应条件下，完全消化1.0pmol的rA20需要1U的Exonuclease T。而1U的Exonuclease T 可以在30分钟内从50pmol Fam-labeled poly-dT酶切产生1nmol dT 。相当于两者的每活性相差约50倍左右。

Exonuclease T对3'端末端含有一个胞嘧啶的RNA底物，降解活性会降低100倍；对3'端末端含有两个连续的胞嘧啶的底物，没有降解活性。因此Exonuclease T难以降解3'端含有胞嘧啶的单链RNA。

碧云天生产的Exonuclease T用于催化降解双链DNA和单链DNA的效果可参考图1。

图1. 碧云天生产的Exonuclease T (D6003)用于催化降解双链DNA和单链DNA的效果图。A. 在20µl反应体系(50mM Potassium Acetate，20mM Tris-acetate，10mM Magnesium Acetate，1mM DTT (pH7.9 @ 25ºC))中加入20pmol的不同类型DNA底物，以及5U的Exonuclease T，25ºC孵育30分钟进行反应，反应完成后65ºC孵育20分钟以终止反应。取反应后产物5μl，加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳60分钟)，之后用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，碧云天生产的Exonuclease T可有效将ssDNA和3'突出的双链DNA，从3'-5'方向进行消化降解，但不能作用于平末端、5'突出的双链DNA。B. 在20µl反应体系(50mM Potassium Acetate，20mM Tris-acetate，10mM Magnesium Acetate，1mM DTT (pH7.9 @ 25ºC))中加入20pmol长度为50nt的ssDNA，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Exonuclease T，25ºC孵育30分钟进行反应，反应完成后65ºC孵育20分钟以终止反应。取反应后产物5μl，加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，然后进行1%琼脂糖凝胶电泳(140V电泳30分钟)，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的Exonuclease T产品相比，具有类似的消化降解ssDNA的效果。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

用途：去除双链DNA的3'突出末端生成平末端；DNA测序或SNP分析前，去除PCR反应中的单链引物；去除nested PCR中的单链引物；去除样品中的单链DNA，保留双链DNA [3]。

来源：纯化自携带编码大肠杆菌Exonuclease T基因的E.coli重组菌株。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to release 1nmol of single dT nucleotides from 50pmol of Fam-labeled polythymidine substrate in 30 minutes at 25ºC。

纯度：不含除Exonuclease T以外的其它种类的DNA/RNA外切酶，不含DNA/RNA内切酶。

酶储存液：10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4 @ 25ºC)。

10X Reaction Buffer ：500mM Potassium Acetate, 200mM Tris-acetate, 100mM Magnesium Acetate, 10mM DTT (pH7.9 @ 25ºC)。

失活或抑制：65ºC孵育20分钟可使Exonuclease T失活。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D6003S-1	Exonuclease T (5U/µl)	50μl
D6003S-2	10X Reaction Buffer	0.25ml
-	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D6003M-1	Exonuclease T (5U/µl)	250μl
D6003M-2	10X Reaction Buffer	1.25ml
-	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D6003L-1	Exonuclease T (5U/µl)	1ml
D6003L-2	10X Reaction Buffer	5ml
-	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，至少两年有效。

注意事项：

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 参考下表在冰浴中配制如下反应体系(以50μl体系为例)：

Reagent	Volume	Final Concentration
Nuclease-Free Water	(47-x)μl	-
10X Reaction Buffer	2μl	1X
Substrate	xμl (5nmol bases)	0.1nmol/µl
Exonuclease T	1μl	0.1U/µl
Total Volume	50μl	-

注1：为获得最好的底物酶切效果，实验过程中可参考酶活单位定义对酶用量进行适当调整，摸索最优反应体系。
注2：如果同时进行多个反应，可以把上表中除Exonuclease T之外所有成分提前混合，分装到各反应管中，最后再加入Exonuclease T。
2. 按上表配制好反应体系后，适当轻轻混匀，随后低速离心使粘附在管壁上的液体沉至管底。
3. 反应条件：25ºC孵育30分钟。注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。
4. 终止反应：65ºC孵育20分钟使Exonuclease T失去活性。
5. 取酶切消化后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳分析，拍照观察并分析酶切效果。如果需要从琼脂糖凝胶中回收DNA样品，推荐使用D0056 DNA凝胶回收试剂盒；如果需要从酶切消化反应体系中纯化DNA样品，推荐使用D0033 PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒。
参考文献：
1. Zuo Y, Deutscher MP. J Biol Chem. 2002. 277(51): 50155-50159.
2. Zuo Y, Deutscher MP. J Biol Chem. 2002. 277(33): 29654-29661.
3. Hsiao YY, Fang WH, Lee CC, Chen YP, Yuan HS. PLoS Biol. 2014. 12(3): e1001803.
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产品编号	产品名称	包装
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D6006M	RecJf Exonuclease	7.5KU
D6006L	RecJf Exonuclease	30KU
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R7096M	RNase T1	500000U