Lambda Exonuclease
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产品编号 D7084L
数量
¥ 5988.00
产品包装:
1KU 5KU 25KU
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碧云天生产的Lambda Exonuclease,即λ Exonuclease,λ核酸外切酶或Lambda核酸外切酶,是一种特异性作用于DNA的5´→3´核酸外切酶,能选择性地沿5´→3´方向消化5’端磷酸化的双链DNA,对单链DNA和5’端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化[1, 2]。 Lambda Exonuclease对5´-0H端的切割速度比5´-P端慢约20倍;对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。Lambda Exonuclease是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组酶。

碧云天生产的Lambda Exonuclease对一条链带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的Lambda Exonuclease (D7084)对仅一条链带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中,加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(其中一条核酸链带有5´磷酸化修饰,另一条链无5´磷酸化修饰),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease,37℃孵育30分钟进行反应,反应完毕后加入10mM EDTA终止反应,并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液,180V电泳40分钟,之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟,即可拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的降解带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。

碧云天生产的Lambda Exonuclease对5´磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果参考图2。

图2. 碧云天生产的Lambda Exonuclease (D7084)对5´磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中,加入10pmol 26nt单链线性DNA片段(5´磷酸化修饰),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease,37℃孵育30分钟进行反应,反应完毕后加入10mM EDTA终止反应,并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液,180V电泳40分钟;之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟,即可拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的降解带有5´磷酸化修饰的单链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。

碧云天生产的Lambda Exonuclease对无5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图3。

图3. 碧云天生产的Lambda Exonuclease (D7084)对无5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中,加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(无5´磷酸化修饰),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease,37℃孵育30分钟进行反应,反应完毕后加入10mM EDTA终止反应,并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液,180V电泳40分钟;之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟,即可拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,均不能有效的消化无5´磷酸化修饰的双链线性DNA。图中效果仅供参考。

用途:生成单链PCR产物用于DNA测序;DNA单链构象多态性(SSCP)分析;滚环扩增;从双链DNA片段生成单链DNA;PCR产物的克隆;质粒制备净化。

来源:纯化自携带编码大肠杆菌Lambda核酸外切酶基因的E.coli重组菌株。

酶活性: Lambda exonuclease is a highly processive 5'→3' exodeoxyribonuclease, selectively digests the 5’-phosphorylated strand of double-stranded DNA, exhibits low activity on single-stranded DNA and non-phosphorylated DNA, and has limited activity at gaps in DNA [1, 2]。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 10nmol of acid-soluble deoxyribonucleotide from double-stranded substrate in a total reaction volume of 50μl in 30minutes at 37℃ in 1X Lambda Exonuclease Reaction Buffer with 1μg sonicated duplex [3H]-DNA.

纯度:不含除Lambda Exonuclease之外的其它种类的外切酶,不含内切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:25mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, (pH8.0 @25℃)。

10X Reaction Buffer: 670mM Glycine-KOH, 25mM MgCl2, 500µg/ml BSA, (pH9.4 @25℃)。

失活或抑制:加入EDTA至终浓度为至少10mM,75℃孵育10分钟可使Lambda Exonuclease失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7084S-1 Lambda Exonuclease (5U/μl) 200μl
D7084S-2 10X Reaction Buffer 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7084M-1 Lambda Exonuclease (5U/μl) 1ml
D7084M-2 10X Reaction Buffer 5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7084L-1 Lambda Exonuclease (5U/μl) 5ml
D7084L-2 10X Reaction Buffer 25ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,2年有效。

注意事项:

Lambda Exonuclease的最佳反应温度是37℃,在75℃条件下孵育10分钟可使其完全失活。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.参考下表在冰浴中配制反应体系(以50μl体系为例)。
Reagent Volume
10X Reaction Buffer 5μl
DNA Sample Xμl (up to 5μg)
Lambda Exonuclease (5U/μl) 1μl (5U)
Ultrapure Water Up to 50μl
Total Volume 50μl
2.移液器吹打混匀,低速离心使粘附在管壁上的液体沉降至管底。
3.反应条件:37℃孵育30分钟。
4.终止反应:加入EDTA至终浓度为10mM。
5.热失活:75℃孵育10分钟使Lambda Exonuclease失去活性。
6.将酶切消化后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳分析,拍照观察并分析酶切效果。
7.如果需要进一步纯化处理后的样品,推荐使用以下几种方式之一进行纯化:
a.柱纯化,推荐使用PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒进行(D0033)
b.从琼脂糖凝胶中回收DNA样品,推荐使用DNA凝胶回收试剂盒(D0056)
c.也可酌情进行苯酚/氯仿抽提,然后进行乙醇沉淀。
常见问题:
1.T5 Exonuclease与Lambda Exonuclease (D7084)有何不同?
与Lambda Exonuclease不同,T5 Exonuclease可以降解带缺刻的环状双链DNA。T5 Exonuclease也作用于单链DNA,而Lambda Exonuclease对单链DNA的降解效率较低。
2.T7 Exonuclease与Lambda Exonuclease (D7084)有何不同?
T7 Exonuclease与Lambda Exonuclease不同,能作用于缺刻处且进行性较低,且对单链DNA的降解活性甚至低于Lambda Exonuclease。由于它的进行性较低,因此T7 Exonuclease对于单向嵌套删除可能更有用。在使用T7 Exonuclease时,可通过稀释T7 Exonuclease来控制反应速率。而在使用高度进行性的酶,如Lambda Exonuclease时,稀释使用会产生完全消化的产物和未消化的底物的混合物。
3.Exonuclease I能否与双链核酸外切酶一起使用来清理质粒制剂?
Exonuclease I可与Lambda Exonuclease一起使用以清理质粒制备物。核酸外切酶III和T7核酸外切酶也有效,但会损坏有缺刻的质粒。虽然可以使用核酸外切酶I,但我们建议在质粒制备后使用核酸外切酶V (RecBCD)去除染色体DNA。
参考文献:
1.Little JW. J Biol Chem. 1967 Feb 25;242(4):679-86.
2.Mitsis PG, Kwagh JG. Nucleic Acids Res. 1999 Aug 1;27(15):3057-3063.
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