碧云天的NA-Red (Nucleic Acid Red，核酸红)是一种EB (Ethidium bromide，溴化乙锭)的升级换代产品，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。NA-Red具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光，适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。
NA-Red比EB和SYBR Green更安全。NA-Red在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，NA-Red的诱变性远小于EB。EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性，而NA-Red仅仅在浓度高达20微克/毫升时，并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常NA-Red在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升，大大低于可导致诱变的浓度。NA-Red和碧云天的另外一种安全型核酸染料NA-Green，由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA，并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。
NA-Red检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。NA-Red的检测灵敏度比EB高8-10倍，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，NA-Red和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，NA-Red预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸的染色效果差，而NA-Red对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。推荐使用的NA-Red浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高NA-Red的工作浓度。
NA-Red的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而NA-Red的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。NA-Red的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含NA-Red的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
NA-Red可以使用和EB相同的检测体系。NA-Red和EB的激发光和发射光都非常接近，可以直接用NA-Red替换EB，而不必更换已有的凝胶观察、拍照或成像系统(约300nm激发)。NA-Red的激发光谱和发射光谱请参考图1。

图1. NA-Red的激发光谱和发射光谱

NA-Red的使用方法和EB一致。NA-Red可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更高一些。但由于NA-Red本身已经非常灵敏，通常采用把NA-Red直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
NA-Red对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。
通过凝胶回收试剂盒(如碧云天或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的NA-Red，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。
包装清单：

保存条件：
室温保存，至少两年有效。
注意事项：
为确保使用的不是假冒的NA-Red，可以用细胞培养液把NA-Red稀释至1X，然后对培养的活细胞进行染色。随后在荧光显微镜下尝试用各种激发光观察，如果发现活细胞细胞核出现明显的荧光，则可以判定为假冒产品。如果各种激发光下活细胞均无荧光，则说明该核酸染料是不能进入活细胞的高度安全的染料。具有强致突变性的吖啶橙(Acridine Orange)染色核酸后呈现荧光，但其可以染色活细胞，而NA-Red不会染色活细胞。
制备好的NA-Red琼脂糖凝胶，在4℃避光条件下通常可以保存3-5天。
NA-Red琼脂糖凝胶再次熔化使用时，为取得更好的观察效果，需要添加适量NA-Red。 
电泳之后的凝胶不建议重复使用。
电泳后再使用NA-Red染色的凝胶一般不需要脱色。如果发现背景太高，可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
NA-Red和NA-Green除了可以染色双链DNA外，也可染色单链DNA和RNA。NA-Red对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。NA-Red对单链核酸的染色灵敏度约为NA-Green的5倍。
如果使用聚丙烯酰胺凝胶，请使用浸泡染色法染胶，并延长染色时间至30分钟-1小时。
如果观察到条带弥散或者分离不理想，建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题，说明与染料无关，请尝试以下方法：使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。
本产品兼容常用的电泳缓冲液，例如TAE和TBE。
NA-Red不属于有毒有害物质，并通过了环境安全相关测试，相关废弃物无需特殊处理，可以参考常规化学试剂进行处理。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
NA-Red和EB(溴化乙锭)一样可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种：
1. 琼脂糖凝胶中添加NA-Red。
根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时，按照每100毫升胶液加入50微升NA-Red的比例(2000:1)加入NA-Red。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适量的DNA或RNA在该胶中电泳后，在紫外灯下可以观察到明亮的核酸条带。说明：NA-Red非常稳定，所以NA-Red可以像EB一样在琼脂糖凝胶液加热融解后但未凝固前加入并混匀，也可以在琼脂糖融解前加入，然后再微波炉加热融解并混匀。
2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色。
按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入100-200微升NA-Red的比例(500-1000:1)加入NA-Red，配制成NA-Red染色液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中，加入适量上述配制好的NA-Red染色液，确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(约30-50rpm)染色20-30分钟。染色时间根据胶的厚度而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后，在紫外灯下即可观察核酸条带。要观察到更为清晰的条带，可以在染色后用水漂洗1-2次，每次3-5分钟，以消除背景，然后在适当紫外灯下或用凝胶成像系统观察。NA-Red染色液可以重复使用3次左右。NA-Red染色液也可以一次大量制备，在室温下避光保存，直至用完。对于核酸需要回收的情况，操作过程中需要注意避免核酸酶污染。

附录：如何快速鉴别EB(溴化乙锭)和NA-Red
由于EB和NA-Red溶液颜色相似，在核酸染色后又采用相同的检测系统进行检测，所以除了使用液相色谱-质谱(LC-MS)技术鉴定分子量外，特别需要有一个快速区别EB和NA-Red的简单方法。我们研究发现通过固定发射波长(Emission wavelength)、扫描激发波长(Excitation wavelength)的方式，可以快速鉴别EB和NA-Red。如图2，固定发射波长为600nm，240-360nm扫描激发波长。可以发现在没有核酸的情况下，不同浓度的EB本身可以在300nm处有激发最高峰，整体扫描图谱非常清晰(图A)，与在有核酸(如质粒)的情况下也基本一致(图B)；而NA-Red在没有核酸的情况下，本身很难被激发，即荧光背景非常弱，虽然在250-300nm有一定的激发峰，但不是很明显(图A)，与在有核酸(如质粒)的情况下形成鲜明的对比(图B)。最为明显的是，在没有核酸的情况下，EB本身的荧光强度大大高于NA-Red。这样就可以通过简单的荧光检测来区分EB和NA-Red了。

图2. 对于EB、NA-Red及各自与质粒的混合物，固定发射波长为600nm，在240-360nm范围内进行激发波长扫描。

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