碧云天生产的RecJf Exonuclease,即RecJf核酸外切酶,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种Mg2+依赖的、特异性作用于单链DNA的5’端核酸外切酶。
RecJf Exonuclease是RecJ Exonuclease和maltose binding protein的融合表达蛋白,和RecJ Exonuclease有相同的酶活性。
RecJf Exonuclease能够沿5'→3'方向降解单链DNA;RecJf Exonuclease也可以外切降解双链DNA中的长度大于6nt的5’突出末端(5’-overhang);RecJf Exonuclease对于5’端为磷酸或羟基(5’-P or 5’-OH)的单链DNA有相近的酶切效果;RecJf Exonuclease不能消化和降解RNA;RecJf Exonuclease的酶活性依赖于镁离子[1]。
碧云天生产的RecJf Exonuclease消化线性ssDNA的效果请参考图1:
图1. 碧云天生产的RecJf Exonuclease (D6006)消化线性单链DNA的效果图。在50µl反应体系(50mM NaCl, 10mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT )中,加入合成的1μg 136nt单链DNA (A)或者经PCR扩增产生的1μg 136bp双链DNA片段(B),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的RecJf Exonuclease,37℃孵育1小时,然后立即置于65℃孵育20分钟以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有基本相当的降解单链线性DNA的效果,但均不能降解双链DNA。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。
用途:本产品可用于从5'端降解单链DNA,也可用于部分消除双链DNA的5'单链突出末端(不能完全得到平末端的双链DNA)。RecJf Exonuclease常应用于同源重组(Homologous recombination)、碱基切除(Base excision)和甲基定向错配修复(Methyl-directed mismatch repair)等的遗传学和生化实验中[2]。
来源:由大肠杆菌的recJ基因和maltose binding protein融合表达,经纯化而获得。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 0.05nmol TCA soluble deoxyribonucleotide in a total reaction volume of 50μl in 30 minutes at 37℃。
纯度:不含除RecJf Exonuclease之外的其它种类的DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。
酶储存液:10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4 @ 25℃)。
10X Reaction Buffer:500mM NaCl, 100mM Tris-HCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT (pH7.9 @ 25℃)。
失活或抑制:65℃孵育20分钟可使RecJf Exonuclease失活。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6006S-1 | RecJf Exonuclease (30U/μl) | 50μl |
D6006S-2 | 10X Reaction Buffer | 250μl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6006M-1 | RecJf Exonuclease (30U/μl) | 250μl |
D6006M-2 | 10X Reaction Buffer | 1.25ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6006L-1 | RecJf Exonuclease (30U/μl) | 1ml |
D6006L-2 | 10X Reaction Buffer | 5ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存,至少一年有效。
注意事项:由于RecJf Exonuclease只特异性催化5'→3'方向单链线性DNA的降解,不能从3'→5'方向降解单链线性DNA,也不能作用于双链DNA,因而使用RecJf Exonuclease时,请注意选择适当的相应底物类型。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Volume | Final Concentration |
ssDNA | xμl | 0.02ug/μl |
10X Reaction Buffer | 5μl | 1X |
RecJf Exonuclease (30U/μl) | 1μl | 0.6U/μl |
Nuclease-free Water | (44-x)μl | - |
Total Volume | 50μl | - |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D0071 | DNA上样缓冲液(6X) | 2ml |
D0072 | BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) | 2ml |
D0107 | DNA Ladder (0.1-10kb, 21 bands) | 100次 |
D0109 | DNA Ladder (0.1-10 kb, 21 bands, with BeyoRed) | 100次 |
D0110 | DNA Ladder (0.2-12kb, 12 bands) | 100次 |
D0111 | DNA Ladder (0.2-12kb, 12 bands, with BeyoRed) | 100次 |
D0161S | BeyoGel™琼脂糖预制胶(1%, NA-Red, TAE, 8孔) | 10块 |
D0163S | BeyoGel™琼脂糖预制胶(2%, NA-Red, TAE, 8孔) | 10块 |
D6006S | RecJf Exonuclease | 1.5KU |
D6006M | RecJf Exonuclease | 7.5KU |
D7012 | DNA末端平滑试剂盒 | 20次 |
D7073 | DNase I | 200U |
D7076 | DNase I | 1000U |
D7080S | T7 Endonuclease I | 250U |
D7080M | T7 Endonuclease I | 1250U |
D7080L | T7 Endonuclease I | 5KU |
D7082S | T5 Exonuclease | 1KU |
D7082M | T5 Exonuclease | 5KU |
D7102S | BeyoNGS™ Tn5 Transposase | 800pmol |
D7102M | BeyoNGS™ Tn5 Transposase | 4000pmol |
D7362S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 100U |
D7362M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 500U |
D7013S | Quick Blunting Kit | 20次 |
D7013M | Quick Blunting Kit | 100次 |
R7096S | RNase T1 | 100KU |
R7096M | RNase T1 | 500KU |