碧云天生产的RNase T1 (Ribonuclease T1)，中文名为核糖核酸酶T1，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台通过大肠杆菌表达、纯化获得的高品质重组RNase T1。

RNase T1来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)，是一种核糖核酸内切酶，特异性地在单链RNA的鸟嘌呤核糖核苷酸(G)后进行切割。在反应中，RNase T1切割鸟嘌呤核糖核苷酸3'-磷酸基团和相邻核糖核苷酸5'-羟基之间的磷酸二酯键，形成2’,3’环磷酸腺苷中间体，即使3’末端形成G-cP，随后水解为相应的3’末端带有GMP (G-P)的寡核苷酸[1]。RNase T1的活性不依赖于金属离子。

碧云天生产的RNase T1对含单个G的单链RNA的酶切效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的RNase T1对含单个G的单链RNA的酶切效果图。M: Small RNA Ladder (R0206)。反应体系(20μl): 50mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃), 2mM EDTA, 2mM DTT, 2U/μl RNase Inhibitor (R0102, 抑制RNase A等但不会抑制RNase T1), 2μM RNA Oligos，图中指定量的来自T公司和Beyotime生产的RNase T1。配制好反应体系后，37℃孵育15min进行反应。反应结束后，立即加入4μl 6X DNA Loading Buffer，100℃加热10min，取6μl进行尿素(7M)变性聚丙烯酰胺(15%)凝胶电泳。将1μl Small RNA Ladder与1μl 2X RNA Loading Buffer (R0215)混合，100℃加热10min，取2μl分别与样品一起进行凝胶电泳。电泳结束后，将Gel-Red (EB升级换代产品，10000X) (D0140)用双蒸水进行1:5000稀释，室温染色15min，并在紫外灯下观察实验结果。如图所示，40nt的底物RNA Oligos经RNase T1切割后，产生15nt和25nt的 RNA Oligo产物。本产品与T公司的产品相比，对单链RNA具有基本一致的酶切效果。图中效果仅供参考，不同的实验条件下获得的实际检测效果可能会略有不同。

用途：去除DNA中的RNA；去除制备的重组蛋白中的RNA；RNA测序；与RNase A结合使用于核糖核酸酶保护分析(RNA protection assay)；测定不含G或低G含量DNA模板的转录水平。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因为米曲霉(Aspergillus oryzae)的rntA基因。

分子量：12.4kDa。

活性定义：One unit of the enzyme causes an increase in absorbance of 1.0 at 260nm in 15min when yeast RNA is hydrolyzed at 37℃ and pH7.5.

纯度：纯度≥95%；不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。

酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.4), 50% (v/v) glycerol.

Reaction Buffer (10X): 500mM Tris-HCl (pH7.5), 20mM EDTA.

失活或抑制：金属离子Mg²⁺ (100mM MgCl₂约抑制40%的活性)、Ca²⁺ (10mM CaCl₂约抑制30%的活性)、Zn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺和单核苷酸(2'-GMP、3'-GMP等)均可抑制RNase T1的活性，Guanylyl 2'-5' guanosine是RNase T1的特异性抑制剂[2]。RNase T1对热有较高的耐受性，在pH6.0的溶液中，可100℃加热耐受10min；但在pH>9.0的碱性溶液中不稳定。RNase T1的热失活是可逆的。将反应体系加热到100℃并不能终止反应[3]。可通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除RNase T1。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R7096S-1	RNase T1 (1000U/μl)	100μl
R7096S-2	10X Reaction Buffer	1ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
R7096M-1	RNase T1 (1000U/μl)	500µl
R7096M-2	10X Reaction Buffer	5ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，至少两年有效。

注意事项：

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.含G单链RNA的酶切：
a.对于含G单链RNA的酶切，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。

Reagent	Volume	Final Concentration
DEPC Water (DNase, RNase free)	(16.4-x)μl	-
10X Reaction Buffer	2μl	1X
RNase Inhibitor (40U/μl)	1μl	2U/μl
DTT (100mM)	0.4μl	2mM
Single-stranded RNA Containing G Nucleotide	xμl	RNA≤50ng/μl
RNase T1 (1000U/μl)	0.2μl	10U/μl
Total volume	20μl	-

注：为避免RNase A等环境中的RNase污染使底物RNA降解，建议在反应体系中加入RNase Inhibitor (为了维持RNase Inhibitor的活力，溶液中需要至少含有1mM DTT)。底物RNA应在RNase Inhibitor加入并混匀之后加入。
b.按上表配制好反应体系后，用移液器轻轻吹打混匀，随后离心沉降液体。如同时进行多个反应，可以把上表中除底物RNA之外的所有溶液和酶提前混合并分装，最后加入底物RNA。
c.反应条件：37℃孵育15分钟。根据实际情况，可适当延长孵育时间，使酶切反应更加充分。通常对于1μg RNA，如果是20μl反应体系，使用0.2μl RNase T1 (1000U/μl)进行酶切时，如果希望酶切比较充分，建议孵育30分钟。如果底物RNA的量比较少，可以适当缩短孵育时间。
2.其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。
参考文献：
1.Takahashi K, Moore S. The Enzymes, V. Academic Press. 1982. 435-468.
2.Eun H-M. Enzymology Primer for Recombinant DNA Technology. Academic Press. 1996.
3.Uchida T, Egami F. The Enzymes, IV. Academic Press. 1971. 205-250.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D0139	Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X)	0.2ml
D0140	Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X)	1ml
D7089	RNase H	100U
R0021	DEPC水(DNase, RNase free)	100ml
R0022	DEPC水(DNase, RNase free)	500ml
R0102-2kU	RNase Inhibitor	2000U
R0102-10kU	RNase Inhibitor	10000U
R0102-50kU	RNase Inhibitor	50000U
R0206	Small RNA Ladder	100μl
R0215	2X RNA Loading Buffer	1ml
R7090S	Thermostable RNase H	250U
R7090M	Thermostable RNase H	1000U
R7090L	Thermostable RNase H	5000U
R7096S	RNase T1	100,000U
R7096M	RNase T1	500,000U
ST576	RNase A (10mg/ml, DNase free)	1ml
ST577	RNase A (100mg/ml, DNase free)	0.5ml
ST578	RNase A (10mg/ml)	1ml
ST579	RNase A (100mg/ml)	0.5ml