RNase H
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产品编号 R7088S
数量
¥ 136.00
产品包装:
250U 1000U 5000U
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碧云天生产的RNase H,即Ribonuclease H,中文名为核糖核酸酶H,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种核糖核酸内切酶,可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键,即不能消化单链或双链DNA或RNA。RNase H广泛用于消化降解cDNA第二链合成后形成的DNA和RNA杂合双链中的RNA,或用于去除杂交到oligo (dT)上的mRNA poly(A)等。

碧云天生产的RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中RNA链的效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中RNA链的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的RNase H,在20µl反应体系(50mM Tris-HCl pH8.3, 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT)中,加入400ng RNA:DNA杂合双链,以及图中指定量的本产品或国外N公司的RNase H,37℃孵育20分钟进行反应,反应完毕后立即冰浴3-5分钟并加入1μl 0.5M EDTA以终止反应。取出5μl反应液,加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳45分钟)之后,用NA-Red (D0128/D0130) (1:2000稀释)室温染色7分钟,随后拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。图中效果仅供参考。

特点:特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA,常用于cDNA第二链的合成。

用途:DNA-RNA杂合链中去除RNA,例如cDNA第二条链合成前去除RNA;RT-PCR/RT-qPCR实验中,cDNA一链合成后去除RNA;通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切;除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A);体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究;DNA-RNA杂合双链的鉴定。

来源:纯化自携带编码大肠杆菌RNase H核糖核酸内切酶基因的E.coli重组菌株。

分子量:约18.4kDa (单体)。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of ribonucleotides from 20 picomoles of a fluorescently labelled 50 base pair RNA-DNA hybrid in a total reaction volume of 50µl in 20minutes at 37℃.

纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含其它核糖核酸酶。

酶储存溶液:10mM Tris-HCl,50mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,200μg/ml BSA,50% (v/v) glycerol, (pH7.4 @25℃)。

Reaction Buffer (10X):500mM Tris-HCl,750mM KCl,30mM MgCl2,100mM DTT, (pH8.3 @25℃)。

失活或抑制: 65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性,加入EDTA至终浓度为至少5mM可抑制RNase H的酶活性。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R7088S-1 RNase H (5U/μl) 50μl
R7088S-2 10X Reaction Buffer 250μl
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7088M-1 RNase H (5U/μl) 200μl
R7088M-2 10X Reaction Buffer 1ml
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7088L-1 RNase H (5U/μl) 1ml
R7088L-2 10X Reaction Buffer 5ml
- 说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,2年有效。

注意事项:

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.DNA-RNA杂合链中去除RNA:
a.用反转录酶,例如BeyoRT M-MuLV反转录酶或BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
b.在冰浴上向已经合成第一条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂:
Reaction Buffer (10X) 2µl
无核酸酶去离子水 17.8µl
RNase H (5U/µl) 0.2µl
c.按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
d.37℃孵育1小时。
e.加入2.5µl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
f.后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
说明:其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成:
a.用反转录酶,例如BBeyoRT M-MuLV反转录酶(D7153)BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-) (D7159)BeyoRT cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) (D7166)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
b.在冰浴上向已经合成第一条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂:
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I 8µl
无核酸酶去离子水 68.8µl
RNase H (5U/µl) 0.2µl
DNA Polymerase I, E.coli 3µl (30U)
c.按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
d.15℃孵育2小时。(注意:反应温度不能超过15℃)
e.加入5µl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀,以终止反应。
f.后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
注:Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃),100mM MgCl2,10mM DTT。
其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。
常见问题:
1.解冻10X Reaction Buffer反应缓冲液时为什么有时会出现白色沉淀,如何解决?
白色沉淀物是10X Reaction Buffer缓冲液中的DTT,解冻和混合后会再次悬浮。重新悬浮的缓冲液完全可以满足其预期用途。
2.RNase H切割RNA碱基的哪一侧?
RNase H裂解RNA的3'-O-P键,生成3'羟基和5'磷酸盐产物。
3.30℃时RNase H的活性怎么样?
在30℃下,RNase H的活性约为90%。
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