碧云天生产的RNase H，即Ribonuclease H，中文名为核糖核酸酶H，是从大肠杆菌表达纯化获得的一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。RNase H广泛用于消化降解cDNA第二链合成后形成的DNA和RNA杂合双链中的RNA，或用于去除杂交到oligo (dT)上的mRNA poly(A)等。

碧云天生产的RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中RNA链的效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中RNA链的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的RNase H，在20µl反应体系(50mM Tris-HCl pH8.3, 75mM KCl, 3mM MgCl₂, 10mM DTT)中，加入400ng RNA:DNA杂合双链，以及图中指定量的本产品或国外N公司的RNase H，37℃孵育20分钟进行反应，反应完毕后立即冰浴3-5分钟并加入1μl 0.5M EDTA以终止反应。取出5μl反应液，加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳45分钟)之后，用NA-Red (D0128/D0130) (1:2000稀释)室温染色7分钟，随后拍照观察结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。图中效果仅供参考。

特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。

用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除RNA；RT-PCR/RT-qPCR实验中，cDNA一链合成后去除RNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究；DNA-RNA杂合双链的鉴定。

来源：纯化自携带编码大肠杆菌RNase H核糖核酸内切酶基因的E.coli重组菌株。

分子量：约18.4kDa (单体)。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of ribonucleotides from 20 picomoles of a fluorescently labelled 50 base pair RNA-DNA hybrid in a total reaction volume of 50µl in 20minutes at 37℃.

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，200μg/ml BSA，50% (v/v) glycerol, (pH7.4 @25℃)。

Reaction Buffer (10X)：500mM Tris-HCl，750mM KCl，30mM MgCl₂，100mM DTT, (pH8.3 @25℃)。

失活或抑制： 65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性，加入EDTA至终浓度为至少5mM可抑制RNase H的酶活性。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R7088S-1	RNase H (5U/μl)	50μl
R7088S-2	10X Reaction Buffer	250μl
-	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
R7088M-1	RNase H (5U/μl)	200μl
R7088M-2	10X Reaction Buffer	1ml
-	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
R7088L-1	RNase H (5U/μl)	1ml
R7088L-2	10X Reaction Buffer	5ml
-	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，2年有效。

注意事项：

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.DNA-RNA杂合链中去除RNA：
a.用反转录酶，例如BeyoRT M-MuLV反转录酶或BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b.在冰浴上向已经合成第一条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：

Reaction Buffer (10X)	2µl
无核酸酶去离子水	17.8µl
RNase H (5U/µl)	0.2µl

c.按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d.37℃孵育1小时。
e.加入2.5µl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
f.后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
a.用反转录酶，例如BBeyoRT M-MuLV反转录酶(D7153)、BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-) (D7159)或BeyoRT cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) (D7166)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b.在冰浴上向已经合成第一条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：

Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I	8µl
无核酸酶去离子水	68.8µl
RNase H (5U/µl)	0.2µl
DNA Polymerase I, E.coli	3µl (30U)

c.按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d.15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
e.加入5µl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀，以终止反应。
f.后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
注：Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。
常见问题：
1.解冻10X Reaction Buffer反应缓冲液时为什么有时会出现白色沉淀，如何解决?
白色沉淀物是10X Reaction Buffer缓冲液中的DTT，解冻和混合后会再次悬浮。重新悬浮的缓冲液完全可以满足其预期用途。
2.RNase H切割RNA碱基的哪一侧?
RNase H裂解RNA的3'-O-P键，生成3'羟基和5'磷酸盐产物。
3.30℃时RNase H的活性怎么样?
在30℃下，RNase H的活性约为90%。
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产品编号	产品名称	包装
ST576	RNase A (10mg/ml, DNase free)	1ml
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ST579	RNase A (100mg/ml)	0.5ml
D7089	RNase H	100U
R7090FT	Thermostable RNase H	50U
R7090S	Thermostable RNase H	250U
R7090M	Thermostable RNase H	1000U
R7090L	Thermostable RNase H	5000U
R7092M	RNase R	2KU
R7092L	RNase R	10KU
R7096S	RNase T1	100000U
R7096M	RNase T1	500000U