RNase T1
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产品编号 R7096S
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¥ 398.00
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100000U 500000U
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碧云天生产的RNase T1 (Ribonuclease T1),中文名为核糖核酸酶T1,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台通过大肠杆菌表达、纯化获得的高品质重组RNase T1。

RNase T1来源于米曲霉(Aspergillus oryzae),是一种核糖核酸内切酶,特异性地在单链RNA的鸟嘌呤核糖核苷酸(G)后进行切割。在反应中,RNase T1切割鸟嘌呤核糖核苷酸3'-磷酸基团和相邻核糖核苷酸5'-羟基之间的磷酸二酯键,形成2’,3’环磷酸腺苷中间体,即使3’末端形成G-cP,随后水解为相应的3’末端带有GMP (G-P)的寡核苷酸[1]。RNase T1的活性不依赖于金属离子。

碧云天生产的RNase T1对含单个G的单链RNA的酶切效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的RNase T1对含单个G的单链RNA的酶切效果图。M: Small RNA Ladder (R0206)。反应体系(20μl): 50mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃), 2mM EDTA, 2mM DTT, 2U/μl RNase Inhibitor (R0102, 抑制RNase A等但不会抑制RNase T1), 2μM RNA Oligos,图中指定量的来自T公司和Beyotime生产的RNase T1。配制好反应体系后,37℃孵育15min进行反应。反应结束后,立即加入4μl 6X DNA Loading Buffer,100℃加热10min,取6μl进行尿素(7M)变性聚丙烯酰胺(15%)凝胶电泳。将1μl Small RNA Ladder与1μl 2X RNA Loading Buffer (R0215)混合,100℃加热10min,取2μl分别与样品一起进行凝胶电泳。电泳结束后,将Gel-Red (EB升级换代产品,10000X) (D0140)用双蒸水进行1:5000稀释,室温染色15min,并在紫外灯下观察实验结果。如图所示,40nt的底物RNA Oligos经RNase T1切割后,产生15nt和25nt的 RNA Oligo产物。本产品与T公司的产品相比,对单链RNA具有基本一致的酶切效果。图中效果仅供参考,不同的实验条件下获得的实际检测效果可能会略有不同。

用途:去除DNA中的RNA;去除制备的重组蛋白中的RNA;RNA测序;与RNase A结合使用于核糖核酸酶保护分析(RNA protection assay);测定不含G或低G含量DNA模板的转录水平。

来源:由大肠杆菌表达,表达基因为米曲霉(Aspergillus oryzae)的rntA基因。

分子量:12.4kDa。

活性定义:One unit of the enzyme causes an increase in absorbance of 1.0 at 260nm in 15min when yeast RNA is hydrolyzed at 37℃ and pH7.5.

纯度:纯度≥95%;不含DNA内切酶和外切酶,不含其它核糖核酸酶。

酶储存溶液:50mM Tris-HCl (pH7.4), 50% (v/v) glycerol.

Reaction Buffer (10X): 500mM Tris-HCl (pH7.5), 20mM EDTA.

失活或抑制:金属离子Mg2+ (100mM MgCl2约抑制40%的活性)、Ca2+ (10mM CaCl2约抑制30%的活性)、Zn2+、Fe2+、Cu2+和单核苷酸(2'-GMP、3'-GMP等)均可抑制RNase T1的活性,Guanylyl 2'-5' guanosine是RNase T1的特异性抑制剂[2]。RNase T1对热有较高的耐受性,在pH6.0的溶液中,可100℃加热耐受10min;但在pH>9.0的碱性溶液中不稳定。RNase T1的热失活是可逆的。将反应体系加热到100℃并不能终止反应[3]。可通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除RNase T1。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R7096S-1 RNase T1 (1000U/μl) 100μl
R7096S-2 10X Reaction Buffer 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7096M-1 RNase T1 (1000U/μl) 500µl
R7096M-2 10X Reaction Buffer 5ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,至少两年有效。

注意事项:

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.含G单链RNA的酶切:
a.对于含G单链RNA的酶切,参考下表在冰浴中配制如下反应体系。
Reagent Volume Final Concentration
DEPC Water (DNase, RNase free) (16.4-x)μl -
10X Reaction Buffer 2μl 1X
RNase Inhibitor (40U/μl) 1μl 2U/μl
DTT (100mM) 0.4μl 2mM
Single-stranded RNA Containing G Nucleotide xμl RNA≤50ng/μl
RNase T1 (1000U/μl) 0.2μl 10U/μl
Total volume 20μl -
注:为避免RNase A等环境中的RNase污染使底物RNA降解,建议在反应体系中加入RNase Inhibitor (为了维持RNase Inhibitor的活力,溶液中需要至少含有1mM DTT)。底物RNA应在RNase Inhibitor加入并混匀之后加入。
b.按上表配制好反应体系后,用移液器轻轻吹打混匀,随后离心沉降液体。如同时进行多个反应,可以把上表中除底物RNA之外的所有溶液和酶提前混合并分装,最后加入底物RNA。
c.反应条件:37℃孵育15分钟。根据实际情况,可适当延长孵育时间,使酶切反应更加充分。通常对于1μg RNA,如果是20μl反应体系,使用0.2μl RNase T1 (1000U/μl)进行酶切时,如果希望酶切比较充分,建议孵育30分钟。如果底物RNA的量比较少,可以适当缩短孵育时间。
2.其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。
参考文献:
1.Takahashi K, Moore S. The Enzymes, V. Academic Press. 1982. 435-468.
2.Eun H-M. Enzymology Primer for Recombinant DNA Technology. Academic Press. 1996.
3.Uchida T, Egami F. The Enzymes, IV. Academic Press. 1971. 205-250.
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产品编号 产品名称 包装
D0139 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 0.2ml
D0140 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 1ml
D7089 RNase H 100U
R0021 DEPC水(DNase, RNase free) 100ml
R0022 DEPC水(DNase, RNase free) 500ml
R0102-2kU RNase Inhibitor 2000U
R0102-10kU RNase Inhibitor 10000U
R0102-50kU RNase Inhibitor 50000U
R0206 Small RNA Ladder 100μl
R0215 2X RNA Loading Buffer 1ml
R7090S Thermostable RNase H 250U
R7090M Thermostable RNase H 1000U
R7090L Thermostable RNase H 5000U
R7096S RNase T1 100,000U
R7096M RNase T1 500,000U
ST576 RNase A (10mg/ml, DNase free) 1ml
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