Klenow Fragment, Exo-
收藏
产品编号 D7041M
数量
¥ 505.00
产品包装:
200U 1000U 5000U
产品简介
使用说明
说明书下载
相关产品
相关论文
产品问答

Klenow Fragment, Exo-,即没有外切酶活性的Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I (E.coli. DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment, Exo-保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5'→3'和3'→5'外切酶活性。

特点:由于Klenow Fragment, Exo-没有外切酶活性,其在末端补平时经常会在3'末端额外加上1个或多个核苷酸,因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。

碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-补平双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-补平双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或T公司(Competitor)的Klenow Fragment, Exo-,37℃孵育10min进行反应,75℃孵育10min以终止反应。取出5μl,加入1μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,之后用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128)室温染色15min,在紫外灯下观察实验结果。如图所示,本产品与T公司的产品相比,具有类似的催化效果。反应体系(20μl):50mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 5mM MgCl2, 1mM DTT, 50µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 5' overhang。dsDNA with 5' overhang (也称具有5'突出末端的双链DNA)是使用D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照该产品说明书推荐的程序,把 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'这两条寡核苷酸进行退火反应得到的产物。

碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-不会打平双链DNA 3'突出(3' overhang)末端的效果请参考图2。

图2.碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-不会打平3'突出(3' overhang)末端的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或本公司的Klenow Fragment,37℃孵育10min进行反应,75℃孵育10min以终止反应。取出5μl,加入1μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,之后用NA-Red D0128 (EB升级换代产品,2000X)室温染色15min,在紫外灯下观察实验结果。如图所示,与本公司的Klenow Fragment相比,本产品不具有打平3'突出末端的活性。反应体系(20μl):50mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 5mM MgCl2, 1mM DTT, 50µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 3' overhang。dsDNA with 3' overhang (也称具有3'突出末端的双链DNA)是使用D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照该产品说明书推荐的程序,把 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTCTATGTATCTATGTAT-3'这两条寡核苷酸进行退火反应得到的产物。

用途:5'突出末端的标记;随机引物法进行DNA标记;Sanger双脱氧法进行DNA测序等。

来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为突变的polA基因片段。

分子量:约68kDa(单体)。

活性定义:37℃ 30分钟内,催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件:67mM potassium phosphate (pH7.4), 6.7mM MgCl2, 1mM 2-mercaptoethanol, 0.033mM dATP, 0.033mM dTTP, 0.4MBq/ml [3H]-dTTP, 62.5µg/ml poly(dA-dT)•poly(dA-dT).

纯度:不含DNA内切酶,不含RNase。

酶储存溶液:25mM Tris-HCl (pH7.5), 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) glycerol.

Reaction Buffer (10X):500mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 50mM MgCl2, 10mM DTT.

缓冲液兼容性:在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y 、2X Y中的活性为100%,在1X B、1X G中的活性为100%;在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。

失活或抑制:75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment, Exo-失活。金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐(PPi),大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment, Exo-有抑制作用。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7041S-1 Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 40µl
D7041S-2 Reaction Buffer (10X) 200µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7041M-1 Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 200µl
D7041M-2 Reaction Buffer (10X) 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7041L-1 Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 1ml
D7041L-2 Reaction Buffer (10X) 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.随机引物法进行DNA标记:
a.参考如下表格设置反应体系:
Reagent Volume
DNA 10µl (100ng)
Reaction Buffer (10X) 5µl
125µM random decamer or hexamer primer 10µl
补充无核酸酶的去离子水 至40µl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟,立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled dNTP) 4µl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol) 1.85MBq (50µCi)
Klenow Fragment, Exo- 1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水 至50µl
b.按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c.对于random decamer primer,37℃孵育5分钟;对于random hexamer primer,37℃孵育10分钟。
d.加入4µl 0.25mM dNTP,混匀后37℃孵育5分钟。
e.加入1µl 0.5M EDTA,pH8.0终止反应。
f.取1µl上述液体用于检测标记的效率。
g.用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。
2.双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的标记:
a.参考如下表格设置反应体系:
Reagent Volume
Digested DNA 10~15µl (0.1~4µg)
Reaction Buffer (10X) 2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) 0.74 MBq (20µCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol) 2.96 MBq (80µCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled dNTP) 2µl
Klenow Fragment, Exo- 0.2µl (1U)
补充无核酸酶的去离子水 至20µl
b.按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c.30℃孵育15分钟。
d.75℃孵育10分钟终止反应。
3.双链DNA 5'突出末端的补平:
a.对于双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的补平,参考下表在冰浴中配制如下反应体系。
Reagent Volume Final Concentration
Nuclease-Free Water (16.6-x)µl -
dsDNA with 5’ Overhang xµl ~0.5µM or 5-200ng/µl
Reaction Buffer (10X) 2µl 1X
dNTP Mix (2.5mM each) 0.4µl 50µM
Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 1µl 0.25U/µl
Total Volume 20µl -
注1:按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体;如果同时进行多个反应,可以把上表中除dsDNA with 5’ overhang之外的所有溶液和酶提前混合,分装到各反应管,最后再加入dsDNA with 5’ overhang。
注2:dsDNA with 5’ Overhang如果是寡核苷酸,最终浓度可以约为0.5µM,如果是消化后的DNA质粒等最终浓度可以约为 5-200ng/µl。
b.37℃孵育10分钟。
c.75℃孵育10分钟以终止反应。
4.其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
D7006 T4 DNA Ligase 40,000U
D7008 T4 DNA Ligase 200,000U
D7012 DNA末端平滑试剂盒 20次
D7035 Klenow Fragment 100U
D7037S Klenow Fragment 200U
D7037M Klenow Fragment 1000U
D7037L Klenow Fragment 5000U
D7039 Klenow Fragment, Exo- 100U
D7041S Klenow Fragment, Exo- 200U
D7041M Klenow Fragment, Exo- 1000U
D7041L Klenow Fragment, Exo- 5000U
D7051 T4 DNA Polymerase 50U
D7052S T4 DNA Polymerase 150U
D7052M T4 DNA Polymerase 750U
D7052L T4 DNA Polymerase 3kU
D7096 T4 Polynucleotide Kinase 100U
D7160FT BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) (试用装) 2000U
D7160S BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) 10KU
D7160M BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) 50KU
D7160L BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) 200KU
D7176S BeyoRT™ III M-MLV反转录酶 10KU
D7176M BeyoRT™ III M-MLV反转录酶 50KU
D7176L BeyoRT™ III M-MLV反转录酶 200KU
D7213S BeyoAmp™ Extra-long DNA Polymerase 200U
D7213M BeyoAmp™ Extra-long DNA Polymerase 1000U
D7215S BeyoAmp™ Plus Extra-long DNA Polymerase 200U
D7215M BeyoAmp™ Plus Extra-long DNA Polymerase 1000U
D7220 BeyoFusion™ DNA Polymerase 200U
D7221 BeyoFusion™ DNA Polymerase 1000U
R0102-2kU RNase Inhibitor 2000U
R0102-10kU RNase Inhibitor 10000U
R0102-50kU RNase Inhibitor 50000U
R0621S T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase) 1000U
R0621M T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase) 5000U
R0632S T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase) 1000U
R0635S T4 RNA Ligase 2, truncated 5kU
R0635M T4 RNA Ligase 2, truncated 20kU
R0635L T4 RNA Ligase 2, truncated 100kU
R0700S 小RNA 3'接头(5'腺苷化, 3'封闭)及连接试剂盒 20次
R0702S Universal miRNA Cloning Linker (5'腺苷化3'封闭) 1µg
R0702M Universal miRNA Cloning Linker (5'腺苷化3'封闭) 5µg
R0716S 5’ DNA Adenylation Kit 10次
R0716M 5’ DNA Adenylation Kit 50次
R7090FT Thermostable RNase H 50U
R7090S Thermostable RNase H 250U
R7090M Thermostable RNase H 1000U
R7090L Thermostable RNase H 5000U
D7371 dNTP Mixture (2.5mM each) 1ml
D7373 dNTP Mixture (25mM each) 250μl
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献: