碧云天生产的RecJ_f Exonuclease，即RecJ_f核酸外切酶，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种Mg²⁺依赖的、特异性作用于单链DNA的5’端核酸外切酶。

RecJ_f Exonuclease是RecJ Exonuclease和maltose binding protein的融合表达蛋白，和RecJ Exonuclease有相同的酶活性。

RecJ_f Exonuclease能够沿5'→3'方向降解单链DNA；RecJ_f Exonuclease也可以外切降解双链DNA中的长度大于6nt的5’突出末端(5’-overhang)；RecJ_f Exonuclease对于5’端为磷酸或羟基(5’-P or 5’-OH)的单链DNA有相近的酶切效果；RecJ_f Exonuclease不能消化和降解RNA；RecJ_f Exonuclease的酶活性依赖于镁离子[1]。

碧云天生产的RecJ_f Exonuclease消化线性ssDNA的效果请参考图1：

图1. 碧云天生产的RecJ_f Exonuclease (D6006)消化线性单链DNA的效果图。在50µl反应体系(50mM NaCl, 10mM Tris-HCl, 10mM MgCl₂, 1mM DTT )中，加入合成的1μg 136nt单链DNA (A)或者经PCR扩增产生的1μg 136bp双链DNA片段(B)，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的RecJ_f Exonuclease，37℃孵育1小时，然后立即置于65℃孵育20分钟以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有基本相当的降解单链线性DNA的效果，但均不能降解双链DNA。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

用途：本产品可用于从5'端降解单链DNA，也可用于部分消除双链DNA的5'单链突出末端(不能完全得到平末端的双链DNA)。RecJ_f Exonuclease常应用于同源重组(Homologous recombination)、碱基切除(Base excision)和甲基定向错配修复(Methyl-directed mismatch repair)等的遗传学和生化实验中[2]。

来源：由大肠杆菌的recJ基因和maltose binding protein融合表达，经纯化而获得。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 0.05nmol TCA soluble deoxyribonucleotide in a total reaction volume of 50μl in 30 minutes at 37℃。

纯度：不含除RecJ_f Exonuclease之外的其它种类的DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。

酶储存液：10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4 @ 25℃)。

10X Reaction Buffer：500mM NaCl, 100mM Tris-HCl, 100mM MgCl₂, 10mM DTT (pH7.9 @ 25℃)。

失活或抑制：65℃孵育20分钟可使RecJ_f Exonuclease失活。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D6006S-1	RecJf Exonuclease (30U/μl)	50μl
D6006S-2	10X Reaction Buffer	250μl
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D6006M-1	RecJf Exonuclease (30U/μl)	250μl
D6006M-2	10X Reaction Buffer	1.25ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
D6006L-1	RecJf Exonuclease (30U/μl)	1ml
D6006L-2	10X Reaction Buffer	5ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，至少一年有效。

注意事项：

由于RecJ_f Exonuclease只特异性催化5'→3'方向单链线性DNA的降解，不能从3'→5'方向降解单链线性DNA，也不能作用于双链DNA，因而使用RecJ_f Exonuclease时，请注意选择适当的相应底物类型。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.参考下表在冰浴中设置反应体系(以50μl体系为例)：

Reagent	Volume	Final Concentration
ssDNA	xμl	0.02ug/μl
10X Reaction Buffer	5μl	1X
RecJf Exonuclease (30U/μl)	1μl	0.6U/μl
Nuclease-free Water	(44-x)μl	-
Total Volume	50μl	-

注：如果同时进行多个反应，可把上表中除底物ssDNA之外的所有组分预先混合，然后再分装到各反应管；RecJ_f Exonuclease使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。
2.适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。
3.反应条件：37℃孵育20分钟。反应时间可以根据实际情况酌情适当延长。
4.终止反应：反应结束后立即将反应产物在65℃条件下孵育20分钟，以终止反应。
5.将反应后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳，拍照观察并分析酶切效果。
6.其它用途请自行参考RecJ_f Exonuclease的相关文献资料进行。
常见问题：
1.能否用RecJ_f Exonuclease生成平末端的DNA?
不能。由于RecJ_f Exonuclease对作用的底物具有一定的选择性，当双链DNA的5'端只有6个甚至更少的碱基突出时，RecJ_f Exonuclease不能很好地发挥其5'→3'的外切酶活性。建议使用碧云天的D7012 DNA末端平滑试剂盒，或使用D7052 T4 DNA Polymerase等进行双链DNA末端的平末端化。
2.RecJ_f Exonuclease与外切酶Ⅰ (Exonuclease Ⅰ)之间有什么不同?
RecJ_f Exonuclease是特异性沿5'→3'方向降解单链线性DNA分子，而Exonuclease Ⅰ是催化单链线性DNA分子3'→5'方向的降解。
3.RecJ_f Exonuclease能否被热失活?
可以。将RecJ_f Exonuclease在65℃条件下孵育20分钟，即可使其完全失活。
4.RecJ_f Exonuclease能否沿5'→3'方向降解单链RNA分子?
不能。RecJ_f Exonuclease是特异性作用于单链DNA的核酸外切酶。只能以ssDNA或带有5'突出末端(> 6nt)的dsDNA为底物，催化单链部分沿着5'→3'方向脱氧核糖核苷酸的移除反应，而不能作用于RNA分子。
参考文献：
1.Han ES, Cooper DL, Persky NS, Sutera VA Jr, Whitaker RD, et al. Nucleic Acids Res. 2006. 34(4):1084-91.
2.Sutera VA, Jr., Han ES, Rajman LA and Lovett ST. J Bacteriol. 1999. 181(19):6098-102.
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