T5 Exonuclease
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产品编号 D7082S
数量
¥ 247.00
产品包装:
1000U 5000U 20kU
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碧云天生产的T5 Exonuclease,即T5核酸外切酶,是一种按照5'→3'方向降解双链或单链DNA的核酸外切酶。T5 Exonuclease既能从单链或双链DNA 5'末端起始消化,也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。T5 Exonuclease无法降解超螺旋双链DNA,并且其降解单链DNA的活性可以通过将反应缓冲液中的Mg2+降低到低于1mM而进行抑制。基于以上特性,T5 Exonuclease常被用于Gibson组装(Gibson Assembly)。

Gibson组装是在恒温条件下,有效连接带有多个重叠序列片段的技术,其基本原理可以概括为三步:(1) T5核酸外切酶从DNA片段的5'末端开始消化,产生互补的单链3'末端(overhangs),促使互补的末端退火;(2) DNA聚合酶填补退火片段的缺口(gaps);(3) DNA连接酶将组装后的切刻(nicks)处进行连接,最后得到一个完整的双链DNA。

碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性dsDNA的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性dsDNA的效果图。在50µl反应体系(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris-acetate pH 7.9, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT)中,加入通过PCR扩增产生的1μg 646bp片段,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的T5 Exonuclease,37℃孵育10min进行反应,反应完毕后立即置于冰浴,并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的降解双链线性DNA的效果。

碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性ssDNA的效果参考图2。

图2. 碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性ssDNA的效果图。在50µl反应体系(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris-acetate pH7.9, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT)中,加入人工合成的1μg 59nt片段,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的T5 Exonuclease,37℃孵育30min进行反应,反应完毕后立即置于冰浴,并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行7M Urea+15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下用1X TBE作为电泳液,180V电泳120min;之后用D0140 Gel-Red溶液(5000:1)室温染色20min,即可拍照观察结果)。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的降解单链线性DNA的效果。

用途:常用于Gibson组装;降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA;从连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物;降解线性和缺刻质粒DNA,以获得高纯度的超螺旋质粒DNA;去除碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA;提高小量抽提质粒cDNA文库的转染效率。

来源:纯化自表达T5 噬菌体D15基因质粒的E.coli菌株。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1 nmol of acid soluble deoxyribonucleotide from double-stranded DNA in 30 minutes at 37 ℃ in a total reaction volume of 50µl.

纯度:不含T5 Exonuclease之外的DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:50mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.1% (v/v)Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol。

10X Reaction Buffer:200mM Tris-acetate (pH7.9, 25℃), 500mM Potassium Acetate, 100mM Magnesium Acetate, 10mM DTT。

失活或抑制:加入EDTA至终浓度为至少11mM或含有SDS的DNA loading buffer (SDS的最终浓度为0.08%)可使T5 Exonuclease失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7082S-1 T5 Exonuclease (10U/µl) 100µl
D7082S-2 10X Reaction Buffer 600µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7082M-1 T5 Exonuclease (10U/µl) 500µl
D7082M-2 10X Reaction Buffer 1.5ml X2
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7082L-1 T5 Exonuclease (10U/µl) 2ml
D7082L-2 10X Reaction Buffer 12ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,三年有效。

注意事项:

T5 Exonuclease是一种对于DNA底物有选择性的核酸外切酶,其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此,消化特定的底物时,须注意适当控制好酶量和反应时间。

T5 Exonuclease的最佳反应温度为37℃,但是在50℃也具有一定活性,因此可用于Gibson组装。

T5 Exonuclease在普通PCR buffer中也具有活性。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.参考下表在冰浴中设置反应体系:
Reagent Volume Final Concentration
DNA xµl 0.02µg/µl
Nuclease-free Water (44-x)µl -
10X Reaction buffer 5µl 1X
T5 Exonuclease 1µl 0.2U/µl
Total Volume 50µl -
注:T5 Exonuclease应最后加入反应体系中,并且加入前须注意混匀反应体系;使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。
2.适当混匀反应体系,低速离心以沉淀液体至管底。
3.反应条件:37℃孵育10-30min。
4.终止反应:反应结束后立即冰浴并加入EDTA至终浓度为11mM以终止反应。
5.将酶切消化后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳分析,拍照观察并分析酶切效果。如果需要从琼脂糖凝胶中回收DNA样品,推荐使用D0056 DNA凝胶回收试剂盒;如果需要从酶切消化反应体系中纯化DNA样品,推荐使用D0033 PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒
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