来源	用途	交叉反应性	理论分子量	实际分子量
Rabbit	WB, IP, IF/ICC, FC	H, M, R, Hm, Mk, Pg	65kDa	65kDa

WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; ICC, Immunocytochemistry; FC, Flow Cytometry.

H, Human; M, Mouse; R, Rat; Hm, Hamster; Mk, Monkey; Pg, Pig.

BeyoAb™系列抗体为经深入测试的优质抗体，并配套提供Western一抗稀释液，可用于Western或其它适当用途的一抗稀释。

建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整，NT, not tested)。

WB	IP	IF/ICC	IHC-P	mIHC-P	FC	ChIP	ChIP-seq
1:1000	1:50	1:500-2000	NT	NT	1:500-2000	NT	NT

本抗体相关应用的代表性检测效果图片请参见Fig. 1。

Fig. 1. BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb (AB3013) was used for Western blot and immunofluorescence.

A. Western analysis of lysates from HeLa cells, untreated (-) or treated (+) as indicated with human TNF-α (40ng/ml, 5min), using BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb (AB3013) at 1:1000 dilution and HRP-labeled Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) (A0208) at 1:500 dilution. GAPDH was detected by Superquick Western Assay Kit for GAPDH (P0971). 21µg protein per lane was loaded and analyzed by BeyoWB™ 80 min Electrophoresis, Transfer and Western Blot Kit (P0002). Exposure time, 4s.

B. Immunofluorescence analysis of HeLa cells, untreated or treated as indicated with human TNF-α (40ng/ml, 5min), using BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb (AB3013) at a dilution of 1:1000 and AF488-labeled Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) (A0423) at 1:200 dilution. Nuclear staining was performed using Hoechst 33342 (C1022).

抗体详细信息如下：

About this Antibody
Name	BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb
Category	Rabbit Monoclonal Antibody (RabMAb); Primary antibody
Isotype	IgG
Purification method	Protein A affinity purification
Positive samples	TNF-α-treated HeLa
Cellular location	-
Customer validation	-
About the Immunogen
Immunogen	A synthetic phosphorylated peptide around Ser536 of human NF-κB p65
Sequence	-
Gene ID	5970
SwissProt	Q04206
Synonyms	NFKB3; Nuclear factor NF-kappa-B p65 subunit; RELA; TF65; Transcription factor p65; p65
Category	NF-κB Signaling; TGF-β Signaling; p38 MAPK Signaling; Toll-Like Receptor Signaling
Background	NF-kappa-B is a pleiotropic transcription factor present in almost all cell types and is the endpoint of a series of signal transduction events that are initiated by a vast array of stimuli related to many biological processes such as inflammation, immunity, differentiation, cell growth, tumorigenesis and apoptosis [1]. NF-kappa-B is a homo- or heterodimeric complex formed by the Rel-like domain-containing proteins RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL and NFKB2/p52 and the heterodimeric p65-p50 complex appears to be most abundant one [2]. In unstimulated cells, NF-κB is sequestered in the cytoplasm by IκB inhibitory proteins. NF-κB-activating agents can induce the phosphorylation of IκB proteins, targeting them for rapid degradation through the ubiquitin-proteasome pathway and releasing NF-κB to enter the nucleus where it regulates gene expression [3].

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
AB3013-20μl	BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb	20μl
AZ020	Western一抗稀释液	20ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
AB3013-50μl	BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb	50μl
AZ050	Western一抗稀释液	50ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
AB3013-200μl	BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb	200μl
AZ200	Western一抗稀释液	200ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，至少一年有效。Western一抗稀释液也可以4ºC保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4ºC保存，长期不使用可以考虑-20ºC保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。

注意事项：

如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4ºC保存。

回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000×g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。
1.Western检测：
a.按照推荐的稀释比例使用本产品提供的Western一抗稀释液稀释抗体或使用特定的Western检测试剂盒中的抗体稀释液稀释抗体。推荐使用碧云天生产的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(P0001)、BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(小鼠一抗用) (P0956)、BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用) (P0958)或BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒(P0002)中的BeyoWB™抗体稀释液稀释抗体。
b.把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4ºC缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动1-2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。如果使用碧云天的上述Western检测试剂盒中的BeyoWB™抗体稀释液稀释抗体，仅须室温孵育15分钟。
c.回收稀释的一抗，4ºC保存以备下次继续使用。
d.按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
如果使用碧云天的上述Western检测试剂盒，请按照试剂盒的说明书进行后续实验操作。
2.免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3.其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
参考文献：
1.Jin Y, Cai Q, Wang L, Ji J, et al. J Exp Clin Cancer Res. 2023. 42(1):269.
2.Papadatos SS, Mitselou A, Lampri E, Varouktsi A, et al. Maedica (Bucur). 2024. 19(3):478-485.
3.Park MY, Ha SE, Kim HH, Bhosale PB, et al. Molecules. 2022. 27(12):3782.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
AB2020	BeyoAb™ NF-κB p65 Rabbit Polyclonal Antibody	20μl/50μl/200µl
AB3013	BeyoAb™ Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit mAb	20μl/50μl/200µl
AF5881	Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Rabbit Polyclonal Antibody	50μl
AN371	Phospho-NF-κB p65(Ser536)抗体(兔单抗)	>20次
A0208	辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)	1ml
A0216	辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)	1ml
A0408	AF350标记山羊抗兔IgG(H+L)	100μl
A0409	AMCA标记山羊抗兔IgG(H+L)	200μl
A0423	AF488标记山羊抗兔IgG(H+L)	100μl
A0468	AF647标记山羊抗兔IgG(H+L)	100μl
A0516	Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)	100μl
A0562	FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)	100μl
A0605	Dylight 405标记山羊抗兔IgG(H+L)	100μl
P0001	BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒	6-15次/30-75次
P0002	BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒	6-15次/30-75次
P0014A/P0014B	SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, Powder)	1L/10L
P0015/P0015L	SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)	2ml/15ml
P0015F	SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X)	2ml
P0017F	BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液	250ml
P0018A	BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒)	100ml/500ml
P0018F	BeyoECL Moon (极超敏ECL化学发光试剂盒)	100ml/500ml
P0021A	Western转膜液	1L
P0021S	PVDF膜浸润活化液	250ml/500ml×2
P0022	丽春红染色液	120ml/500ml
P0023A	Western一抗稀释液	100ml/500ml
P0023B	Western封闭液	100ml/500ml
P0023C	Western洗涤液	250ml/500ml×2
P0023D	Western二抗稀释液	100ml/500ml
P0025	Western一抗二抗去除液(强碱性)	250ml/1L
P0066	预染蛋白质分子量标准(19-117kD)	200μl
P0068	彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD)	200μl
P0071	BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD)	200μl
P0075	BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(10-170kD)	200μl
P0078	BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(15-120kD)	200μl
P0095	免疫染色通透液(Saponin)	100ml/500ml
P0096	免疫染色通透液(Triton X-100)	100ml/500ml
P0097	免疫染色强力通透液	100ml/500ml
P0098	免疫染色固定液	100ml/500ml
P0102	免疫染色封闭液	100ml
P0103	免疫染色一抗稀释液	100ml
P0106	免疫染色洗涤液	250ml
P0108	免疫荧光染色二抗稀释液	100ml
P0220	QuickBlock™封闭液(PBS)	100ml
P0235	QuickBlock™封闭液(10X)	100ml
P0252	QuickBlock™ Western封闭液	100ml/500ml
P0256	QuickBlock™ Western一抗稀释液	100ml/500ml
P0258	QuickBlock™ Western二抗稀释液	100ml/500ml
P0260	QuickBlock™免疫染色封闭液	100ml
P0262	QuickBlock™免疫染色一抗稀释液	100ml
P0265	QuickBlock™免疫荧光染色二抗稀释液	100ml
P0280	InstantView™ SDS-PAGE蛋白染色及上样缓冲液(5X)	1ml
P0946	BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)	200μl/1ml
P0948	BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)	200μl/1ml
P0950	BeyoWB™封闭液	100ml/500ml
P0951	BeyoWB™抗体稀释液	100ml/500ml
P0952-500ml	BeyoWB™洗涤液	500ml
P0955	BeyoWB™ BeyoECL	100ml/500ml
P0956	BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(小鼠一抗用)	6-15次/30-75次
P0958	BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用)	6-15次/30-75次
E6001	MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(4胶)	1套
E6050	MiniBlot™蛋白转膜系统	1套
E6080	BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W)	1套
E6085	BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W)	1套
E6150	MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(2胶/2膜)	1套
E6155	MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/2膜)	1套
FFP24	PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.2μm)	20张/包装
FFP32	PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm)	20张/包装
FFP51	转印滤纸(7.5×10cm)	100张/包装
FFX050	Western洗膜盒(9.0×6.0×3.3cm)	1个/包装
FFX052	Western洗膜盒(9.0×6.6×3.0cm)	1个/包装
FFX055	Western洗膜盒(5格, 14.5×9.8×3.5cm)	1个/包装