BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用)
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产品编号 P0958M
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¥ 1158.00
产品包装:
6-15次 30-75次
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碧云天研发生产的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用) (BeyoWB™ 30 min Western Assay Kit for Rabbit Primary Antibody),也称兔一抗用超快速Western检测试剂盒(Superquick Western Assay Kit for Rabbit Primary Antibody),是一种通常仅需30分钟就可以从完成转印的印迹膜到获得目的蛋白条带的超快速Western检测试剂盒。本试剂盒包含了BeyoWB™封闭液、BeyoWB™抗体稀释液、BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)、BeyoWB™ Western洗涤液、BeyoWB™ BeyoECL A液和B液。本试剂盒使用便捷,能够显著缩短封闭、一抗和二抗孵育等的时间,试剂盒中包含从封闭到化学发光所需的所有溶液,用户仅需自备一抗,转膜完成后通常30分钟内就可以得到高质量的目的蛋白Western结果,可以极大加快目的蛋白的检测速度。

本试剂盒特别适用于有使用相应一抗进行Western检测经验的情况,此时使用原有的一抗配合本试剂盒通常就能在30分钟内实现从完成转印的印迹膜到获得预期的目的蛋白条带。经实测,大多数情况下使用本试剂盒的效果优于原常规检测方法。使用本试剂盒的实际检测效果,请参考图1。图中仅展示了部分检测结果,实测对于更多的一抗,本试剂盒在绝大多数情况下都具有相近或更优的检测效果。

图1.碧云天BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用) (P0958)与常规Western检测效果的比较图。图中BeyoWB™为使用本试剂盒的检测效果,实验条件为:BeyoWB™封闭液封闭5分钟;BeyoWB™抗体稀释液稀释一抗(1:1000),室温孵育15分钟,BeyoWB™洗涤液洗涤30秒3次;BeyoWB™抗体稀释液稀释本试剂盒提供的二抗(1:500),室温孵育5分钟,BeyoWB™洗涤液洗涤30秒3次;显影液为BeyoWB™ BeyoECL。Control为常规Western的检测效果,实验条件为:QuickBlock™ Western封闭液(P0252)封闭10分钟;QuickBlock™ Western一抗稀释液(P0256)稀释一抗(1:1000),室温孵育1小时,Western洗涤液洗涤5分钟3次;QuickBlock™ Western二抗稀释液(P0258)稀释二抗(1:1000),室温孵育1小时,Western洗涤液洗涤5分钟3次;显影液为BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) (P0018A)。293T和HeLa细胞裂解液的蛋白浓度均为2mg/ml。所用一抗分别为:Histone H3 Rabbit Polyclonal Antibody (AF7104)、Phospho-MEK1 (Ser218/222) Rabbit Monoclonal Antibody (AF1786)和β-Catenin Mouse Monoclonal Antibody (AF0069);对应的二抗分别为本试剂盒提供的BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) (P0948)和BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (P0946)。Western印迹成像由BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)完成,同组比较时的曝光时间相同,箭头所示为目的蛋白。如图所示,本试剂盒检测效果与常规Western相近甚至更优。对于本试剂盒和常规Western方法检测的上述印迹膜分别进行自动曝光时,本试剂盒的效果也显著优于常规Western检测方法。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

Western,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,常简写为WB,是用抗体检测蛋白水平的重要方法之一[1]。常规Western检测从转膜后到获得蛋白条带通常需要3小时以上甚至过夜,影响实验效率。而碧云天的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用),转膜后通常30分钟内就可获得目的蛋白条带,大大节约了实验时间。

本试剂盒中的BeyoWB™封闭液封闭时间仅需5分钟,总体效果显著优于传统的基于BSA (牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液。

本试剂盒中的BeyoWB™抗体稀释液针对Western进行了深度优化,可同时用于一抗和二抗的稀释,用其配制的一抗工作液孵育时间仅需15分钟,二抗工作液孵育时间仅需5分钟。本产品稀释和配制的抗体工作液,可以在4ºC保存和使用不少于1个月,并且可以重复使用。

本试剂盒中的BeyoWB™ Western洗涤液用于Western时一抗或二抗孵育后的洗涤,每次洗涤时间仅需30秒即可达到理想效果,降低背景,增强信噪比。

本试剂盒中的BeyoWB™ BeyoECL化学发光试剂,灵敏度极高、背景低、发光时间长,成像效果极优。

本试剂盒提供从封闭到化学发光所需的HRP标记二抗、缓冲液、洗涤液和检测试剂,用户仅需自备在常规Western中使用的一抗,即可在30分钟内获得与常规Western检测相似或更优的目的条带。本系列产品还提供了不包含二抗的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(P0001)和包含二抗的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(小鼠一抗用) (P0956)。对于内参和标签蛋白,推荐使用碧云天的一系列内参蛋白和标签蛋白的超快速Western检测试剂盒,仅需10分钟就能实现从印迹膜到获得预期的目的条带。

如果需要从蛋白样品到WB目的条带的超快速方案,碧云天还研发生产了BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒(P0002),电泳仅需25分钟、转膜仅需10分钟、从完成转印的膜到获得目的蛋白条带仅需30分钟,总计通常不超过80分钟就能实现从蛋白样品到目的条带。该试剂盒中组分齐全,用户仅需自备一抗、二抗、水、无水乙醇及电泳、转印和成像等常规设备即可。

如果检测的是6.6×8.5cm印迹膜,按照每次封闭需要BeyoWB™封闭液5ml、稀释一抗和二抗的BeyoWB™抗体稀释液各5ml,稀释后的一、二抗重复使用3次,洗涤液每次使用10ml,BeyoWB™ BeyoECL工作液每次需要1ml计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以进行6次和30次的Western快速检测。如果检测的是更常见的裁切后的约2×8.5cm印迹膜,按照封闭以及一、二抗孵育液体用量为每次2ml,洗涤液用量每次4ml,发光试剂工作液用量每次0.4ml计算,小包装和中包装分别可以检测15次和75次。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0958S-1 BeyoWB™封闭液 30ml
P0958S-2 BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) 20μl
P0958S-3 BeyoWB™抗体稀释液 20ml
P0958S-4 BeyoWB™ Western洗涤液 400ml
P0958S-5 BeyoWB™ BeyoECL A液 3ml
P0958S-6 BeyoWB™ BeyoECL B液 3ml
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P0958M-1 BeyoWB™封闭液 150ml
P0958M-2 BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) 100μl
P0958M-3 BeyoWB™抗体稀释液 100ml
P0958M-4 BeyoWB™ Western洗涤液 4×500ml
P0958M-5 BeyoWB™ BeyoECL A液 15ml
P0958M-6 BeyoWB™ BeyoECL B液 15ml
- 说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,一年有效。4ºC保存,至少3个月有效。BeyoWB™ BeyoECL A液和B液须避光保存。

注意事项:

请注意回收使用过的一抗工作液和二抗工作液。回收的一、二抗工作液可以再重复使用2次。稀释后的一、二抗工作液,包括使用过的一、二抗工作液,请4ºC保存。

回收后重复使用的一、二抗工作液,使用方法同新鲜稀释的一、二抗工作液。如果在重复使用过程中发现一、二抗工作液出现轻微混浊现象,可以10,000×g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的一、二抗工作液出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。

使用本产品,通常30分钟可得到高质量的目的蛋白Western结果,即封闭5分钟、一抗孵育15分钟、洗涤30秒3次、二抗孵育5分钟、洗涤30秒3次、BeyoWB™ BeyoECL试剂孵育30秒、成像通常0.5分钟之内。

对于6.6×8.5cm的印迹膜,推荐使用碧云天的Western洗膜盒(9.0×6.0×3.3cm) (FFX050)进行洗涤和孵育;对于裁切后的条形印迹膜,推荐使用碧云天的Western洗膜盒(5格, 14.5×9.8×3.5cm) (FFX055)进行洗涤和孵育。

如果需要更多的BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)、BeyoWB™封闭液、BeyoWB™抗体稀释液、BeyoWB™ Western洗涤液和BeyoWB™ BeyoECL,可以单独向碧云天订购BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (P0946)、BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) (P0948)、BeyoWB™封闭液(P0950)、BeyoWB™抗体稀释液(P0951)、BeyoWB™洗涤液(P0952)、BeyoWB™洗涤液(10X) (P0953)和BeyoWB™ BeyoECL (P0955)。

个别情况,如果希望获得到更好的Western结果,可适当增加封闭、一抗、二抗孵育及洗涤的时间,并适当优化成像的曝光时间。

BeyoWB™ BeyoECL A液和B液对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.膜的封闭。
a.完成转膜后,立即把印迹膜(约6.6×8.5cm)放置到预先加入5ml BeyoWB™封闭液的Western洗膜盒(9.0×6.0×3.3cm) (FFX050)中,置于翘板摇床上缓慢摇动,室温封闭5分钟。推荐使用BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673)。后续如果无特殊说明,各种试剂的用量都以约6.6×8.5cm大小的印迹膜为例进行说明。
注1:经反复测试,室温封闭5分钟即可达到理想的封闭效果,但也可以根据实际情况酌情延长封闭时间。
注2:如果使用裁切后约2×8.5cm印迹膜,推荐使用2ml BeyoWB™封闭液,后续使用的各种试剂的体积也须相应按比例缩小。
2.一抗孵育。
a.一抗工作液的配制。根据一抗推荐稀释比例或优化后进行常规Western检测使用的稀释比例进行一抗工作液的配制。例如一抗推荐稀释比例为1:1000时,则在5ml BeyoWB™抗体稀释液中加入5μl一抗并混匀,即可得到5ml一抗工作液;如果推荐稀释比例为1:500,则在5ml BeyoWB™抗体稀释液中加入10μl一抗并混匀。
b.用微型台式真空泵、移液器或滴管等吸尽用于封闭的BeyoWB™封闭液。推荐使用BeyoVac™基础型台式真空吸液器(E6878)或BeyoVac™调速型台式真空吸液器(E6883)。
c.加入5ml一抗工作液。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,推荐用量为2ml。
d.置于翘板摇床上缓慢摇动,室温孵育15分钟
注1:经反复测试,室温孵育15分钟即可达到理想检测效果,但也可以根据实际情况酌情延长一抗孵育时间。
注2:一抗孵育时,请参考步骤3a进行二抗工作液的配制。
e.回收一抗工作液,留待后续重复使用。并吸净残留的一抗工作液。
f.使用BeyoWB™ Western洗涤液洗涤3次,每次的用量为10ml,每次30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,每次的推荐用量为4ml。每次推荐使用真空泵吸净残留的洗涤液。
注:经反复测试,洗涤3次,每次30秒,即可达到理想效果,但也可以根据实际情况每次酌情延长洗涤时间或增加洗涤次数。
3.二抗孵育。
a.二抗工作液的配制。在5ml BeyoWB™抗体稀释液中加入10μl BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)并混匀,即可得到5ml二抗工作液。
b.加入5ml二抗工作液。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,推荐用量为2ml。
c.置于翘板摇床上缓慢摇动,室温孵育5分钟
注:经反复测试,室温孵育5分钟即可达到理想检测效果,但也可以根据实际情况酌情延长抗体孵育时间。
d.回收二抗工作液,留待后续重复使用。并吸净残留的二抗工作液。
e.使用BeyoWB™ Western洗涤液洗涤3次,每次的用量为10ml,每次30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,每次的推荐用量为4ml。每次推荐使用真空泵吸净残留的洗涤液。
4.蛋白检测。
a.BeyoWB™ BeyoECL工作液的配制。混合0.5ml BeyoWB™ BeyoECL A液和0.5ml BeyoWB™ BeyoECL B液,配制成1ml BeyoWB™ BeyoECL工作液,室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,BeyoWB™ BeyoECL工作液配制0.4ml即可。
b.用WB专用镊子(12cm, 翘方头) (FS035)将膜取出,用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面),然后置于一洁净保鲜膜上。
c.滴加1ml BeyoWB™ BeyoECL工作液到膜上,确保使工作液均匀覆盖在膜上,放置30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,BeyoWB™ BeyoECL工作液的推荐用量为0.4ml。
注:通常放置30秒就可以进行后续的成像或压片检测,但也可以根据实际情况酌情延长放置时间。
d.取膜,弃BeyoWB™ BeyoECL工作液,用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间,随后进行化学发光成像仪检测或压片检测。
5.(选做)一抗二抗的去除与内参蛋白的检测。
推荐使用碧云天的Western一抗二抗去除液(中性) (P0025N)去除一抗和二抗用于后续其它目的蛋白的检测。如果希望进行内参蛋白的检测,推荐使用碧云天的Actin超快速Western检测试剂盒(P0970)、GAPDH超快速Western检测试剂盒(P0971)和Tubulin超快速Western检测试剂盒(P0972),仅需10分钟就可以实现从膜到目的条带。
注:详细的Western实验步骤可以参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Begum H, Murugesan P, Tangutur AD. Biotechniques. 2022. 73(1): 58-69.
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产品编号 产品名称 包装
P0001 BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒 6-15次/30-75次
P0002 BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒 6-15次/30-75次
P0946 BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) 200μl/1ml
P0948 BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) 200μl/1ml
P0950 BeyoWB™封闭液 100ml/500ml
P0951 BeyoWB™抗体稀释液 100ml/500ml
P0952-500ml BeyoWB™洗涤液 500ml
P0953-100ml BeyoWB™洗涤液(10X) 100ml
P0955 BeyoWB™ BeyoECL 100ml/500ml
P0956 BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(小鼠一抗用) 6-15次/30-75次
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