碧云天研发生产的Bst 6.0 DNA Polymerase,是一种Bst DNA Polymerase, large fragment (D7050)的同源蛋白,即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA聚合酶大片段的同源蛋白,和Bst DNA Polymerase大片段相比,具有更强的5′→3′DNA聚合酶活性、更强的链置换(Strand displacement)能力、dUTP耐受性、耐盐性以及非离子去垢剂耐受性。Bst 6.0 DNA Polymerase不具有5′→3′和3′→5的核酸外切酶活性,可应用于环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)、交叉引物扩增技术(Crossing priming amplification, CPA)、滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)和基于滚环扩增的等温扩增反应等。Bst 6.0 DNA Polymerase介导的等温扩增温度一般在50-68ºC之间,通常为65ºC,最佳温度与所使用的引物和扩增的产物有关,需要通过实验进行优化。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65°C。
碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase酶活性效果参考图1。
图1. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用不同量的碧云天的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有相当的酶活性效果。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。
碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的dUTP参考图2。
图2. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的高dUTP耐受性的效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用不同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,1.4mM dUTP,0.04U UDGase(D7360S/D7360M),在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有类似的高dUTP耐受性。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。
碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的非离子去垢剂参考图3。
图3. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的高非离子去垢剂耐受性的效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用相同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,5%非离子去垢剂(A, Tween-20; B, NP-40; C, TritonX-100),在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有类似对非离子洗涤剂的高耐受性。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。
碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的钾离子(K+)参考图4。
图4. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的耐盐性(K+)效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用不同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,同时补加KCl至终浓度为10mM、50mM或100mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有类似的耐盐性(K+)。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。
来源:Bst 6.0 DNA Polymerase通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。
纯度:无DNA内切酶和外切酶活性。
用途:环介导等温扩增LAMP、交叉引物扩增技术(CPA) 、滚环扩增(RCA)和解旋酶等温扩增(HDA)等DNA等温扩增,多重置换扩增(MDA),链置换DNA合成,全基因组扩增(WGA),高GC含量的DNA的测序,纳克级DNA模板的快速测序,建库测序等。
酶储存液:10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol (pH 7.5 @ 25℃)。
10X Bst 6.0 Reaction Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 100mM (NH4)2S04, 20mM MgS04, 1%Tween-20 (pH 8.8 @ 25℃)。
失活或抑制:80ºC加热20分钟可使Bst 6.0 DNA Polymerase失活。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7046S-1 | Bst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl) | 200μl |
D7046S-2 | 10X Bst 6.0 Reaction Buffer | 600μl |
D7046S-3 | 100mM MgSO4 | 400μl |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7046M-1 | Bst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl) | 1ml |
D7046M-2 | 10X Bst 6.0 Reaction Buffer | 3ml |
D7046M-3 | 100mM MgSO4 | 2ml |
- | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,两年有效。
注意事项:Bst 6.0 DNA Polymerase不具有5′→3′的核酸外切酶活性。
建议等温扩增反应温度不能高于70ºC,否则会导致酶失活。
Bst 6.0 DNA Polymerase不能用于热循环测序或PCR。
每次等温扩增实验建议设置仅无模板DNA的阴性对照,以排除背景性扩增。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存;
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Volume | Final concentration |
Nuclease-free Water (ST876) | (15.6-x)μl | - |
10X Bst 6.0 Reaction Buffer | 2.5μl | 1X |
MgSO4 (100mM) (ST1488) | 1.5μl | 6mM (8mM total) |
dNTP (25mM each) (D7373) | 1.4μl | 1.4mM each |
FIP/BIP Primers (25X, 40μM) | 1μl | 1.6μM |
F3/B3 Primers (25X, 5μM) | 1μl | 0.2μM |
Loop F/B Primers (25X, 10μM) | 1μl | 0.4μM |
Template | xμl | > 10 copies or more |
Bst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl) | 1μl | 1600U/ml |
Total volume | 25μl | - |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7046S | Bst 6.0 DNA Polymerase | 8kU |
D7046M | Bst 6.0 DNA Polymerase | 40kU |
D7050S | Bst DNA Polymerase, Large Fragment | 800U |
D7050M | Bst DNA Polymerase, Large Fragment | 4000U |
D7053S | phi29 DNA Polymerase | 250U |
D7053M | phi29 DNA Polymerase | 1kU |
D7053L | phi29 DNA Polymerase | 5kU |
D7053XL | phi29 DNA Polymerase | 20kU |
D7055S | Bsu DNA Polymerase, Large Fragment | 200U |
D7055M | Bsu DNA Polymerase, Large Fragment | 1000U |
D7359-250µl | dUTP (100mM) | 250µl |
D7359-1ml | dUTP (100mM) | 1ml |
D7360S | Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) | 1000U |
D7360M | Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) | 5000U |
D7362S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 100U |
D7362M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 500U |
D7364S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 200U |
D7364M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 1000U |
D7364L | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 5000U |
D7371 | dNTP Mixture (2.5mM each) | 1ml |
D7373 | dNTP Mixture (25mM each) | 250μl |
D7376-1ml | dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) | 1ml |
D7376-5ml | dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) | 5ml |