Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod)
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产品编号 D7364M
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¥ 412.00
产品包装:
200U 1000U 5000U
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碧云天生产的Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod),也称Heat-labile Cod UDG,即热敏型鳕鱼UDG,是来源于大西洋鳕鱼(Gadus morhua cod),可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解,从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA,但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

UDG主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为:在PCR反应中加入适量的dUTP,以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成含dU碱基的PCR扩增产物;后续进行PCR反应时,使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA,从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。

本产品为热敏型,在50℃孵育10分钟可以迅速不可逆灭活。在PCR或RT-PCR反应前,PCR或RT-PCR体系中加入Heat-labile Cod UDG室温处理5min,即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR扩增产物的污染。本产品不仅适用于PCR,也适用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等体系。

活性定义:One unit is the amount of enzyme required to liberate 1 nmol uracil from dU-containing DNA in one hour at 37℃.

碧云天生产的Heat-labile Cod UDG酶活性鉴定结果可参考图1。

图1.碧云天和N公司的Heat-labile Cod UDG催化酶解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。使用本产品或国外N公司的酶,在20µl体系,分别以5µl含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物和不同量的(0U, 0.01U, 0.02U, 0.04U, 0.2U) Heat-labile Cod UDG,在1X Heat-labile Cod UDG Buffer,37℃孵育1h,然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与N公司相比,具有相当的酶活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

碧云天生产的 Heat-labile Cod UDG 经灭活处理后酶活鉴定结果可参考图 2。

图2.碧云天和N公司的Heat-labile Cod UDG以及碧云天生产的E. coli UDG (D7360)经50℃10min处理后,催化酶解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。将不同量的E. coli UDG (0U, 0.005U, 0.01U, 0.025U)和碧云天以及N公司不同量的Heat-labile Cod UDG (0U, 0.02U, 0.04U, 0.2U)经50℃ 10min处理之后,在20µl体系,分别以5µl含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物,在1X Heat-labile Cod UDG Buffer,37℃孵育1h,然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,E. coli UDG50℃处理10min之后酶活仅轻微下降,而碧云天和N公司的Heat-labile Cod UDG均完全灭活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

来源:大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。

纯度:不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。

用途:去除含尿嘧啶的单链或双链DNA;去除含dU的PCR产物气溶胶污染;DNA修复与突变检测;提高PCR产物的克隆效率;提高点诱变的效率;研究蛋白质-DNA相互作用。用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、one-step RT-PCR体系。

酶储存溶液:50mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 0.5mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerol。

10X Heat-labile Cod UDG Buffer:700mM Tris-HCl, 100mM NaCl, 10mM EDTA, 1mg/ml BSA, pH 8.0 at 25℃。

失活或抑制:50℃加热10min可以使Heat-labile Cod UDG完全失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7364S-1 Heat-labile Cod UDG (1U/μl) 200µl
D7364S-2 10X Heat-labile Cod UDG Buffer 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7364M-1 Heat-labile Cod UDG (1U/μl) 1ml
D7364M-2 10X Heat-labile Cod UDG Buffer 5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7364L-1 Heat-labile Cod UDG (1U/μl) 5ml
D7364L-2 10X Heat-labile Cod UDG Buffer 10ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少一年有效。

注意事项:

Heat-labile Cod UDG酶在大多数PCR反应缓冲液中均具有活性,但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系,首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。通常取含dUTP的PCR扩增产物,参考图1加入适量UDG,观察能否有效降解含dUTP的PCR扩增产物。

dNTP/dUTP推荐选购碧云天的D7376 dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM)

Heat-labile Cod UDG长期储存请置于-80℃保存,常规使用请于-20℃保存。-80℃保存会结冻,尽量避免反复冻融。

如果需要将Heat-labile Cod UDG酶应用于One-Step RT-PCR或者One-Step qRT-PCR体系,需要选择耐热反转录酶,并需要将逆转录温度设置为50℃-55℃。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.按照常规反应体系设置PCR或RT-PCR反应体系,同时加入Heat-labile Cod UDG至最终浓度为0.01U/μl,混匀。通常仅加入PCR或RT-PCR的buffer即可,无需加入UDG的buffer。
2.25℃孵育5min (去除可能的含dUTP的PCR扩增产物的污染),随后进入PCR或RT-PCR程序。
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