pCMV-Cre-EGFP
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产品编号 D2608-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-Cre-EGFP是碧云天自行研发的含有CMV启动子的用于在哺乳动物细胞中表达带有EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的Cre Recombinase (Cre重组酶)的表达质粒。来自条件性基因敲除(Conditional gene knockout) 小鼠等含有预先插入loxP位点的细胞在转染本质粒后,本质粒表达的Cre Recombinase可以导致两个loxP位点间的基因删除,从而实现条件性基因敲除。

Cre重组酶是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase),也是一种酪氨酸重组酶(tyrosine recombinase),它可识别34bp的loxP位点(两端为两个13bp的反向重复序列(inverted repeats),中间是8bp的间隔区(图1)并催化loxP位点之间的DNA发生重组;重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同,两个含单loxP位点的DNA将发生融合:两个正向重复的loxP位点间的DNA将以环状形式被切割,而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转(图2)。

图1. loxP位点序列图。Cre重组酶与两端13bp反向重复序列(小写字母)结合,中间是8bp不对称中心间隔区(大写字母),箭头所示为Cre重组酶的酶切位点。

图2. Cre-loxP位点特异性重组示意图。

pCMV-Cre-EGFP质粒转染HeLa细胞后的荧光表达效果,可以看到EGFP标签的Cre重组酶主要分布在细胞核中(图3)。

图3. pCMV-Cre-EGFP质粒转染HeLa细胞后的表达效果图。左图为明场照片,中图为荧光照片,右图为叠加照片。

本质粒为卡那霉素抗性,转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-Cre-EGFP质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Cre recombinase 677-1705
EGFP 1718-2437
multiple cloning site 2349-2497
T7 promoter and T7 primer binding site 2541-2562
SV40 polyA signal 2574-2957
f1 origin of ss-DNA replication 3095-3399
bla promoter 3424-3548
SV40 promoter 3568-3906
neomycin/kanamycin resistance ORF 3941-4732
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 4733-5191
pUC origin 5320-5987

pCMV-Cre-EGFP质粒(6039bp)的图谱如下:

pCMV-Cre-EGFP的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2608 pCMV-Cre-EGFP.pdf

pCMV-Cre-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-Cre-EGFP)包括:

AflII AhdI AscI BaeI BbsI BbvCI BlpI
BmgBI BsiWI BspEI BspQI BstEII BstXI BstZ17I
EarI EcoNI FseI NotI PflMI PmeI PmlI
PpuMI PspXI SacII SapI SbfI ScaI SgrAI
SmaI SrfI SwaI TspMI XcmI XmaI

pCMV-Cre-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Cre-EGFP)包括:

AccI GT`MK,AC 2463 KasI G`GCGC,C 4068
AclI AA`CG,TT 1047 MfeI C`AATT,G 2821
AfeI AGC|GCT 660 MluI A`CGCG,T 2957
ApaI G,GGCC`C 2492 MscI TGG|CCA 4151
ApaLI G`TGCA,C 5673 NarI GG`CG,CC 4069
AsiSI GCG,AT`CGC 1133 NdeI CA`TA,TG 240
AvaI C`YCGR,G 2474 NheI G`CTAG,C 597
BamHI G`GATC,C 1032 NruI TCG|CGA 891
BclI T`GATC,A 2728 PaeR7I C`TCGA,G 2474
BglII A`GATC,T 2468 PaqCI CACCTGCNNNN`NNNN, 1286
BmtI G,CTAG`C 597 PflFI GACN`N,NGTC 4187
BsaI GGTCTCN`NNN,N 5058 PluTI G,GCGC`C 4068
BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 3118 PshAI GACNN|NNGTC 1512
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 1360 PspOMI G`GGCC,C 2492
BsoBI C`YCGR,G 2474 PstI C,TGCA`G 2444
BsrGI T`GTAC,A 2427 SacI G,AGCT`C 651
BssHII G`CGCG,C 914 SalI G`TCGA,C 2462
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 382 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3841
DraIII CAC,NNN`GTG 3184 SfoI GGC|GCC 4070
EagI C`GGCC,G 3975 SpeI A`CTAG,T 2486
Eco53kI GAG|CTC 653 StuI AGG|CCT 3890
EcoRI G`AATT,C 2450 Tth111I GACN`N,NGTC 4187
Esp3I CGTCTCN`NNNN, 1360 XbaI T`CTAG,A 2480
HindIII A`AGCT,T 2438 XhoI C`TCGA,G 2474
HpaI GTT|AAC 2834 XmnI GAANN|NNTTC 885

如需对pCMV-Cre-EGFP质粒中插入片段Cre-EGFP进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:

T3 primer (620-639): 5' AATTAACCCTCACTAAAGGG 3'

T7 primer (2541-2562): 5' GTAATACGACTCACTATAGGGC 3'

pCMV-Cre-EGFP的全序列信息::D2608 pCMV-Cre-EGFP 全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2608-1µg pCMV-Cre-EGFP 1μg
D2608-100µg pCMV-Cre-EGFP 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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