Bst 6.0 DNA Polymerase
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产品编号 D7046M
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¥ 1998.00
产品包装:
8kU 40kU
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碧云天研发生产的Bst 6.0 DNA Polymerase,是一种Bst DNA Polymerase, large fragment (D7050)的同源蛋白,即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA聚合酶大片段的同源蛋白,和Bst DNA Polymerase大片段相比,具有更强的5′→3′DNA聚合酶活性、更强的链置换(Strand displacement)能力、dUTP耐受性、耐盐性以及非离子去垢剂耐受性。Bst 6.0 DNA Polymerase不具有5′→3′和3′→5的核酸外切酶活性,可应用于环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)、交叉引物扩增技术(Crossing priming amplification, CPA)、滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)和基于滚环扩增的等温扩增反应等。Bst 6.0 DNA Polymerase介导的等温扩增温度一般在50-68ºC之间,通常为65ºC,最佳温度与所使用的引物和扩增的产物有关,需要通过实验进行优化。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65°C。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase酶活性效果参考图1。

图1. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用不同量的碧云天的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有相当的酶活性效果。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的dUTP参考图2。

图2. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的高dUTP耐受性的效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用不同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,1.4mM dUTP,0.04U UDGase(D7360S/D7360M),在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有类似的高dUTP耐受性。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的非离子去垢剂参考图3。

图3. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的高非离子去垢剂耐受性的效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用相同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,5%非离子去垢剂(A, Tween-20; B, NP-40; C, TritonX-100),在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有类似对非离子洗涤剂的高耐受性。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的钾离子(K+)参考图4。

图4. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的耐盐性(K+)效果图。在25μl体系,以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板,使用不同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase,引物:1.6µM FIP/BIP,0.2µM F3/B3,0.4µM Loop F/B,1.4mM dNTP each,在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM,同时补加KCl至终浓度为10mM、50mM或100mM,65ºC孵育1小时,80ºC加热20分钟灭活,然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有类似的耐盐性(K+)。-, 仅未添加酶的阴性对照;+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。

来源:Bst 6.0 DNA Polymerase通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。

纯度:无DNA内切酶和外切酶活性。

用途:环介导等温扩增LAMP、交叉引物扩增技术(CPA) 、滚环扩增(RCA)和解旋酶等温扩增(HDA)等DNA等温扩增,多重置换扩增(MDA),链置换DNA合成,全基因组扩增(WGA),高GC含量的DNA的测序,纳克级DNA模板的快速测序,建库测序等。

酶储存液:10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol (pH 7.5 @ 25℃)。

10X Bst 6.0 Reaction Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 100mM (NH4)2S04, 20mM MgS04, 1%Tween-20 (pH 8.8 @ 25℃)。

失活或抑制:80ºC加热20分钟可使Bst 6.0 DNA Polymerase失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7046S-1 Bst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl) 200μl
D7046S-2 10X Bst 6.0 Reaction Buffer 600μl
D7046S-3 100mM MgSO4 400μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7046M-1 Bst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl) 1ml
D7046M-2 10X Bst 6.0 Reaction Buffer 3ml
D7046M-3 100mM MgSO4 2ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,两年有效。

注意事项:

Bst 6.0 DNA Polymerase不具有5′→3′的核酸外切酶活性。

建议等温扩增反应温度不能高于70ºC,否则会导致酶失活。

Bst 6.0 DNA Polymerase不能用于热循环测序或PCR。

每次等温扩增实验建议设置仅无模板DNA的阴性对照,以排除背景性扩增。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存;

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 引物设计。
环介导的等温扩增引物的设计可以参考http://primerexplorer.jp/e/,建议使用V5版本。具体操作手册可以在http://primerexplorer.jp/e/v5_manual/index.html下载。环介导等温扩增引物的初步筛选可参照该操作手册,具体需要通过实验来验证比较合适的引物。LAMP引物由4个或6个(含Loop)引物组成,建议加入Loop环引物设计,即设计6条引物进行实验。
2. 以LAMP等温扩增为例,参考下表设置反应体系。
Reagent Volume Final concentration
Nuclease-free Water (ST876) (15.6-x)μl -
10X Bst 6.0 Reaction Buffer 2.5μl 1X
MgSO4 (100mM) (ST1488) 1.5μl 6mM (8mM total)
dNTP (25mM each) (D7373) 1.4μl 1.4mM each
FIP/BIP Primers (25X, 40μM) 1μl 1.6μM
F3/B3 Primers (25X, 5μM) 1μl 0.2μM
Loop F/B Primers (25X, 10μM) 1μl 0.4μM
Template xμl > 10 copies or more
Bst 6.0 DNA Polymerase (40U/μl) 1μl 1600U/ml
Total volume 25μl -
注1:在配制反应体系完成后,可每25μl体系的反应管管盖加适量高浓度的SYBR Green I 1μl,待等温扩增反应结束后,8000×g离心1分钟,反应体系变荧光绿为阳性,保持无色或棕色为阴性。也可以无需添加指示剂,待反应程序结束后,可见反应液明显变浑浊为阳性,反应液保持透明为阴性。
注2:如需优化反应,可调整Mg2+浓度(4-10mM),酶量(0.04-0.32U/μl)或改变反应温度(50-68ºC)。
注3:如果通过琼脂糖凝胶电泳或其它需要打开LAMP反应容器的方法进行分析,请设置辅助分析区域和设备,以避免污染。
注4:由于反应比较迅速,为了确保实验的重现性,建议模板DNA最后加入。
注5:强烈建议设置未加模板的阴性对照,以确保扩增的特异性。
注6:为了防止在配制试剂时发生污染,请务必在超净工作台内进行操作。
注7:试剂及模板DNA的配制操作尽量需要和PCR产物的电泳等分析在不同的区域进行,以免发生污染。
3. 反应程序:65ºC 60分钟。
4. 灭活:80ºC 20分钟。
5. 如实验需要,可以用2.0%的琼脂糖凝胶进行电泳分析,电泳图显示扩增产物为梯度条带为阳性,无梯度条带为阴性。
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