碧云天生产的Bst DNA Polymerase, Large Fragment,即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase I大片段,具有5'→3' DNA聚合酶活性,不具有3'→5'和5'→3'的核酸外切酶活性。Bst DNA Polymerase, Large Fragment具有很强的链置换(strand displacement)能力,可应用于核酸的等温扩增反应,如环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)等。
Bst DNA Polymerase, Large Fragment介导的等温扩增温度一般在50-68℃之间,通常为65℃。与Bst DNA Polymerase 2.0相比,本产品在进行等温扩增时不具有将dUTP掺入合成的DNA链的能力。
Bst DNA Polymerase具有5'→3'的核酸外切酶活性,而Bst DNA Polymerase, Large Fragment通过删除突变而缺失了5'→3'核酸外切酶活性。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65℃。
碧云天生产的Bst DNA Polymerase, Large Fragment酶活性参考图1。
图1. 碧云天Bst DNA Polymerase, Large Fragment进行环介导等温扩增反应的效果。使用本产品或N公司的Bst DNA Polymerase, Large Fragment,在25µl体系,分别以不同量的(10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9 ng)烟草花叶病毒的CaMV35启动子为模板,8U的Bst DNA Polymerase, Large Fragment (图1中简写为Bst),引物:1.6µM FIP/BIP、0.2µM F3/B3、0.4µM LoopF/B,1.4mM dNTP each,在1X Bst Reaction Buffer中补加MgSO4至终浓度为8mM,65℃孵育1h,80℃加热20min灭活,然后进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与Competitor N公司的产品相比,具有略好或至少相当的酶活性效果。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
来源:Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I的大片段通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。
纯度:无DNA内切酶和外切酶活性。
用途:环介导等温扩增LAMP、解旋酶等温基因扩增(HDA)等DNA等温扩增,多重置换扩增(MDA),全基因组扩增(WGA),高GC含量DNA的测序,纳克级DNA模板的快速测序,建库测序等。
酶储存溶液:10mM Tris-HCl (pH7.5), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerol。
10X Bst Reaction Buffer:200mM Tris-HCl, 100mM KCl, 100mM (NH4)2SO4, 20mM MgSO4, 1% Triton X-100, pH8.8 at 25°C。
失活或抑制:80℃加热20min。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7050S-1 | Bst DNA Polymerase, Large Fragment (8U/μl) | 100µl |
D7050S-2 | 10X Bst Reaction Buffer | 300µl |
D7050S-3 | 100mM MgSO4 | 200µl |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7050M-1 | Bst DNA Polymerase, Large Fragment (8U/μl) | 500µl |
D7050M-2 | 10X Bst Reaction Buffer | 1.5ml |
D7050M-3 | 100mM MgSO4 | 1ml |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:Bst DNA Polymerase, Large Fragment不具有3'→5'核酸外切酶活性。
建议等温扩增反应温度不能高于70℃,否则会导致酶失活。
Bst DNA Polymerase,Large Fragment不能用于热循环测序和PCR。
每次等温扩增实验注意设置无模板DNA作为阴性对照。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Volume | Final concentration |
Nuclease-Free Water | (13.5-x)μl | - |
10X Bst Reaction Buffer | 2.5μl | 1X |
MgSO4 (100mM) | 1.5μl | 6mM (8mM total) |
dNTP (10mM each) | 3.5μl | 1.4mM each |
FIP/BIP Primers (25X, 40μM) | 1μl | 1.6μM |
F3/B3 Primers (25X, 5μM) | 1μl | 0.2μM |
LoopF/B Primers (25X, 10μM) | 1μl | 0.4μM |
Template | xμl | >10 copies or more |
Bst DNA Polymerase, Large Fragment (8U/μl) | 1μl | 320U/ml |
Total volume | 25μl | - |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7050S | Bst DNA Polymerase, Large Fragment | 800U |
D7050M | Bst DNA Polymerase, Large Fragment | 4000U |
D7053S | phi29 DNA Polymerase | 250U |
D7053M | phi29 DNA Polymerase | 1kU |
D7053L | phi29 DNA Polymerase | 5kU |
D7053XL | phi29 DNA Polymerase | 20kU |
D7055S | Bsu DNA Polymerase, Large Fragment | 200U |
D7055M | Bsu DNA Polymerase, Large Fragment | 1000U |
D7359-250µl | dUTP (100mM) | 250µl |
D7359-1ml | dUTP (100mM) | 1ml |
D7360S | Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) | 1000U |
D7360M | Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) | 5000U |
D7362S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 100U |
D7362M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) | 500U |
D7364S | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 200U |
D7364M | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 1000U |
D7364L | Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) | 5000U |
D7371 | dNTP Mixture (2.5mM each) | 1ml |
D7373 | dNTP Mixture (25mM each) | 250μl |
D7376-1ml | dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) | 1ml |
D7376-5ml | dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) | 5ml |