pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞(Drosophila Schneider 2)组成型表达质粒pAc5.1/V5-His A (D4751),pAc5.1/V5-His B (D4755)和pAc5.1/V5-His C (D4759)的阳性对照质粒。本质粒转染S2果蝇细胞后,可通过β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)或Western Blot测定S2果蝇细胞中由lacZ基因的转录的β-半乳糖苷酶原(β-galactosidase)表达情况,评估S2果蝇细胞的转染效果、重组蛋白表达水平,辅助摸索磷酸钙法转染S2果蝇细胞的最佳条件。
S2果蝇细胞,也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞,源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞,在摇瓶中为悬浮细胞,无需CO2,可在室温(26-28ºC)培养,生长速度快,细胞密度高,可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白,兼容无血清培养基,已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。
本质粒采用的Ac5启动子(The Drosophila Actin 5C promoter)可以高效启动重组蛋白在S2果蝇细胞组成型表达,使用组成型Ac5启动子与诱导型MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)的重组蛋白表达量相当[3]。
本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞,后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到含有目的基因的诱导型S2果蝇稳定细胞株。建议在筛选稳定细胞株之前,先通过瞬时转染测试重组蛋白能否表达。
本质粒在多克隆位点之后含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH),便于重组蛋白的检测和纯化。
本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。
pAc5.1/V5-His/lacZ质粒的图谱如下:
pAc5.1/V5-His/lacZ质粒的主要信息如下:
Base pairs | 8384 |
Ac5 promoter | 56-2568 |
lacZ | 2597-5641 |
MCS (Multiple Cloning Site) | 5642-5668 |
V5 Tag | 5669-5710 |
6X His Tag | 5720-5737 |
SV40 poly (A) signal | 5810-5944 |
ori | 6566-7154 |
Ampicillin | 7325-8185 |
Ampicillin promoter | 8186-8290 |
pAc5.1/V5-His/lacZ表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D4748 pAc5.1/V5-His_lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒).pdf
pAc5.1/V5-His/lacZ中没有的酶切位点包括:
AarI | AbsI | AccIII | AcvI | AjiI | AjuI | AloI |
Aor13HI | ApaI | AscI | AspI | AspA2I | AsuNHI | AvrII |
BarI | BbrPI | BlnI | BmgBI | BmtI | BplI | BsaAI |
BsaXI | BseAI | Bsp13I | Bsp120I | BspEI | BspOI | BspQI |
BstBAI | BstENI | BstSNI | BtrI | Cfr42I | CpoI | CsiI |
CspI | CspCI | Eco72I | Eco105I | EcoNI | EcoRI | FalI |
FseI | FspAI | HindIII | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI |
Kpn2I | KspI | LguI | MabI | MreI | MroI | NheI |
Nt.BspQI | PacI | PalAI | PasI | PciSI | PflFI | PI-PspI |
PI-SceI | PmaCI | PmlI | Ppu21I | PspCI | PspOMI | PsyI |
RigI | RsrII | Rsr2I | SacII | SanDI | SapI | SbfI |
SdaI | SexAI | SfiI | Sfr303I | SgrAI | SgrBI | SgrDI |
SgsI | SmiI | SnaBI | SrfI | Sse8387I | SstII | SwaI |
Tth111I | XagI | XbaI | XmaJI |
pAc5.1/V5-His/lacZ中的单酶切位点包括:
Acc65I | AflII | AgeI | AhdI | AsiSI | BamHI | BbvCI |
BglII | BssHII | BstBI | BstEII | BstZ17I | Bsu36I | DraIII |
EcoRV | KasI | KpnI | MauBI | NarI | NcoI | NotI |
NsiI | PaeR7I | PfoI | PluTI | PmeI | PpuMI | PshAI |
PspXI | PstI | SalI | ScaI | SfoI | SmaI | SpeI |
SphI | StuI | StyI | TspMI | XhoI | XmaI |
pAc5.1/V5-His/lacZ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
Ac5 Forward (2525-2544): 5'-ACACAAAGCCGCTCCATCAG-3'
BGH Reverse (5760-5777): 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'
pAc5.1/V5-His/lacZ的全序列信息: D4748 pAc5.1/V5-His_lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 全序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D4748-1µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4748-100µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D4701-1µg | pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4701-100µg | pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4705-1µg | pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4705-100µg | pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4708-1µg | pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4708-100µg | pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4712-1µg | pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4712-100µg | pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4716-1µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4716-100µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4719-1µg | pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4719-100µg | pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4721-1µg | pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4721-100µg | pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4724-1µg | pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4724-100µg | pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4727-1µg | pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4727-100µg | pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4732-1µg | pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4732-100µg | pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4735-1µg | pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4735-100µg | pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4739-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4739-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4742-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4742-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4745-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4745-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4748-1µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4748-100µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4751-1µg | pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4751-100µg | pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
D4755-1µg | pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4755-100µg | pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
D4759-1µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4759-100µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |