pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞(Drosophila Schneider 2)组成型表达质粒。本质粒与pAc5.1/V5-His A (D4751)和pAc5.1/V5-His B (D4755)的区别在于多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)的阅读框不同,便于重组蛋白与C端V5标签和His标签的融合表达。碧云天同时提供相应的阳性对照质粒pAc5.1/V5-His/lacZ (D4748)。
S2果蝇细胞,也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞,源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞,在摇瓶中为悬浮细胞,无需CO2,可在室温(26-28ºC)培养,生长速度快,细胞密度高,可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白,兼容无血清培养基,已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。
本质粒采用的Ac5启动子(The Drosophila Actin 5C promoter)可以高效启动重组蛋白在果蝇S2果蝇细胞组成型表达,使用组成型Ac5启动子与诱导型MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)的重组蛋白表达量相当[3]。碧云天同时提供诱导型MT启动子系列产品:pMT/V5-His A (D4716)、pMT/V5-His B (D4719)、pMT/V5-His C (D4721)。
本质粒不带有分泌信号肽(Secretion signal peptide),如果插入基因不带有原生分泌信号肽,重组蛋白将在S2果蝇细胞内表达。如果需要重组蛋白分泌到培养基上清中,建议购买含有BiP分泌信号肽的质粒:pMT/BiP/V5-His A (D4727)、pMT/BiP/V5-His B (D4732)或pMT/BiP/V5-His C (D4735)。
本质粒的克隆插入基因应包含一个带有ATG启动密码子的Kozak翻译启动序列((G/A)NNATGG),以便正确启动重组蛋白的表达。
本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞,后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到含有目的基因的诱导型S2果蝇稳定细胞株。建议在筛选稳定细胞株之前,先通过瞬时转染测试重组蛋白能否表达。
本质粒在多克隆位点之后含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH),便于重组蛋白的检测和纯化。
本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。
pAc5.1/V5-His C质粒的图谱如下:
pAc5.1/V5-His C质粒的主要信息如下:
Base pairs | 5371 |
Ac5 promoter | 56-2568 |
MCS (Multiple Cloning Site) | 2579-2655 |
V5 Tag | 2656-2697 |
6X His Tag | 2707-2724 |
SV40 poly (A) signal | 2797-2931 |
ori | 3553-4141 |
Ampicillin | 4312-5172 |
Ampicillin promoter | 5173-5277 |
pAc5.1/V5-His C的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D4759 pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒).pdf
pAc5.1/V5-His C中没有的酶切位点包括:
AarI | AbsI | AccIII | AcvI | AdeI | AjiI | AjuI |
AleI | AloI | Aor13HI | ApaI | AscI | AspI | AspA2I |
AsuNHI | AvrII | AxyI | BaeI | BarI | BbrPI | BlnI |
BmgBI | BmtI | BplI | BsaAI | BsaXI | Bse21I | BseAI |
BsePI | Bsp13I | Bsp120I | BspEI | BspOI | BspQI | BssHII |
BssNAI | Bst1107I | BstBAI | BstENI | BstSNI | BstZ17I | Bsu36I |
BtrI | Cfr42I | CpoI | CsiI | CspI | CspCI | DraIII |
Eco72I | Eco81I | Eco105I | EcoNI | FalI | FseI | FspAI |
HindIII | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI | Kpn2I | KspI |
LguI | MabI | MauBI | MreI | MroI | NheI | Nt.BspQI |
OliI | PacI | PalAI | PasI | PauI | PciSI | PflFI |
PfoI | PI-PspI | PI-SceI | PmaCI | PmlI | Ppu21I | PspCI |
PspOMI | PsyI | PteI | RigI | RsrII | Rsr2I | SacII |
SanDI | SapI | SbfI | SdaI | SexAI | SfiI | Sfr303I |
SgrAI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SmiI | SnaBI | SrfI |
Sse8387I | SstII | SwaI | Tth111I | XagI | XbaI | XcmI |
XmaJI |
pAc5.1/V5-His C中的单酶切位点包括:
Acc65I | AflII | AgeI | AhdI | AsiSI | BamHI | BanII |
BbvCI | BfuAI | BglII | BlpI | BsiWI | BspDI | BspMI |
BstBI | BstEII | BtgI | ClaI | DrdI | Eco53kI | EcoRI |
EcoRV | HpaI | KasI | KpnI | MluI | NarI | NcoI |
NdeI | NmeAIII | NotI | NsiI | PaeR7I | PflMI | PluTI |
PmeI | PpuMI | PshAI | PspXI | SacI | SalI | ScaI |
SfoI | SmaI | SphI | StuI | StyI | TspMI | XhoI |
XmaI |
pAc5.1/V5-His C质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
Ac5 Forward (2525-2544): 5'-ACACAAAGCCGCTCCATCAG-3'
BGH Reverse (2747-2764): 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'
pAc5.1/V5-His C的全序列信息: D4759 pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) 全序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D4759-1µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4759-100µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D4701-1µg | pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4701-100µg | pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4705-1µg | pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4705-100µg | pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4708-1µg | pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4708-100µg | pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4712-1µg | pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4712-100µg | pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4716-1µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4716-100µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4719-1µg | pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4719-100µg | pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4721-1µg | pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4721-100µg | pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4724-1µg | pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4724-100µg | pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4727-1µg | pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4727-100µg | pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4732-1µg | pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4732-100µg | pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4735-1µg | pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4735-100µg | pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4739-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4739-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4742-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4742-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4745-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4745-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4748-1µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4748-100µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4751-1µg | pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4751-100µg | pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
D4755-1µg | pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4755-100µg | pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
D4759-1µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4759-100µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |