pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)
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pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞(Drosophila Schneider 2)组成型表达质粒pAc5.1/V5-His A (D4751),pAc5.1/V5-His B (D4755)和pAc5.1/V5-His C (D4759)的阳性对照质粒。本质粒转染S2果蝇细胞后,可通过β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)或Western Blot测定S2果蝇细胞中由lacZ基因的转录的β-半乳糖苷酶原(β-galactosidase)表达情况,评估S2果蝇细胞的转染效果、重组蛋白表达水平,辅助摸索磷酸钙法转染S2果蝇细胞的最佳条件。

S2果蝇细胞,也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞,源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞,在摇瓶中为悬浮细胞,无需CO2,可在室温(26-28ºC)培养,生长速度快,细胞密度高,可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白,兼容无血清培养基,已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。

本质粒采用的Ac5启动子(The Drosophila Actin 5C promoter)可以高效启动重组蛋白在S2果蝇细胞组成型表达,使用组成型Ac5启动子与诱导型MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)的重组蛋白表达量相当[3]。

本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞,后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到含有目的基因的诱导型S2果蝇稳定细胞株。建议在筛选稳定细胞株之前,先通过瞬时转染测试重组蛋白能否表达。

本质粒在多克隆位点之后含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH),便于重组蛋白的检测和纯化。

本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。

pAc5.1/V5-His/lacZ质粒的图谱如下:

pAc5.1/V5-His/lacZ质粒的主要信息如下:

Base pairs 8384
Ac5 promoter 56-2568
lacZ 2597-5641
MCS (Multiple Cloning Site) 5642-5668
V5 Tag 5669-5710
6X His Tag 5720-5737
SV40 poly (A) signal 5810-5944
ori 6566-7154
Ampicillin 7325-8185
Ampicillin promoter 8186-8290

pAc5.1/V5-His/lacZ表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D4748 pAc5.1/V5-His_lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒).pdf

pAc5.1/V5-His/lacZ中没有的酶切位点包括:

AarI AbsI AccIII AcvI AjiI AjuI AloI
Aor13HI ApaI AscI AspI AspA2I AsuNHI AvrII
BarI BbrPI BlnI BmgBI BmtI BplI BsaAI
BsaXI BseAI Bsp13I Bsp120I BspEI BspOI BspQI
BstBAI BstENI BstSNI BtrI Cfr42I CpoI CsiI
CspI CspCI Eco72I Eco105I EcoNI EcoRI FalI
FseI FspAI HindIII I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI
Kpn2I KspI LguI MabI MreI MroI NheI
Nt.BspQI PacI PalAI PasI PciSI PflFI PI-PspI
PI-SceI PmaCI PmlI Ppu21I PspCI PspOMI PsyI
RigI RsrII Rsr2I SacII SanDI SapI SbfI
SdaI SexAI SfiI Sfr303I SgrAI SgrBI SgrDI
SgsI SmiI SnaBI SrfI Sse8387I SstII SwaI
Tth111I XagI XbaI XmaJI

pAc5.1/V5-His/lacZ中的单酶切位点包括:

Acc65I AflII AgeI AhdI AsiSI BamHI BbvCI
BglII BssHII BstBI BstEII BstZ17I Bsu36I DraIII
EcoRV KasI KpnI MauBI NarI NcoI NotI
NsiI PaeR7I PfoI PluTI PmeI PpuMI PshAI
PspXI PstI SalI ScaI SfoI SmaI SpeI
SphI StuI StyI TspMI XhoI XmaI

pAc5.1/V5-His/lacZ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

Ac5 Forward (2525-2544): 5'-ACACAAAGCCGCTCCATCAG-3'

BGH Reverse (5760-5777): 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'

pAc5.1/V5-His/lacZ的全序列信息: D4748 pAc5.1/V5-His_lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 全序列.txt

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D4748-1µg pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 1µg
D4748-100µg pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 100µg
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-20ºC保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
参考文献:
1. Schneider I. J Embryol Exp Morphol. 1972. 27(2):353-65.
2. Moraes AM, Jorge SA, Astray RM, Suazo CA, Calderón Riquelme CE, et al. Biotechnol Adv. 2012. 30(3):613-28.
3. Kovach MJ, Carlson JO, Beaty BJ. Insect Mol Biol. 1992. 1(1):37-43.
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