pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)
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产品编号 D4712-100μg
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1μg 100μg
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pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞(Drosophila Schneider 2)诱导型表达质粒pMT/V5-His A (D4716),pMT/V5-His B (D4719)和pMT/V5-His C (D4721)的阳性对照质粒。本质粒转染S2果蝇细胞后,可通过β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)或Western Blot测定S2果蝇细胞中由lacZ基因的转录的β-半乳糖苷酶原(β-galactosidase)表达情况,评估S2果蝇细胞的转染效果、重组蛋白表达水平,辅助摸索磷酸钙法转染S2果蝇细胞的最佳条件。

S2果蝇细胞,也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞,源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞,在摇瓶中为悬浮细胞,无需CO2,可在室温(26-28ºC)培养,生长速度快,细胞密度高,可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白,兼容无血清培养基,已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。

本质粒采用的MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)受重金属离子的(Zn2+, Cd2+)的严格调控,因此S2果蝇细胞可通过加入CuSO4或CdCl2瞬时高效启动外源基因表达。建议使用500-1000μM CuSO4或10μM CdCl2诱导外源基因表达。CuSO4细胞毒性低于CdCl2,CdCl2启动效率高于CuSO4 [3]。

本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞,后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到诱导型表达β-半乳糖苷酶原的S2果蝇稳定细胞株。

本质粒含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH),便于重组蛋白的检测和纯化。

本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。

pMT/V5-His/lacZ质粒的图谱如下:

pMT/V5-His/lacZ质粒的主要信息如下:

Base pairs 6554
M13 Forward 379-395
MT promoter 411-833
lacZ 874-3918
MCS (Multiple Cloning Site) 3919-3945
V5 Tag 3946-3987
6X His Tag 3997-4014
SV40 poly (A) signal 4056-4190
M13 Reverse 4334-4350
lac operator 4358-4374
lac promoter 4382-4412
CAP binding site 4427-4448
ori 4736-5324
Ampicillin 5495-6355
Ampicillin promoter 6356-6460

pMT/V5-His/lacZ表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D4712 pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒).pdf

pMT/V5-His/lacZ中没有的酶切位点包括:

AarI AatI AbsI AccIII AcvI AflII AjuI
AloI Aor13HI ApaI AscI AsiSI AspI AspA2I
AsuNHI AvrII BamHI BarI BbrPI BbvCI BfrI
BglII BlnI BmtI BoxI BplI BsaAI BseAI
Bsp13I Bsp19I Bsp68I Bsp120I Bsp1407I BspEI BspOI
BspTI BsrGI BssT1I Bst98I BstAFI BstAUI BstBAI
BstENI BstPAI BstSNI BtuMI Cfr9I Cfr42I CpoI
CsiI CspI CspCI Eco72I Eco105I Eco130I Eco147I
EcoNI EcoRI EcoT14I EcoT22I ErhI FalI FseI
FspAI I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI Kpn2I KspI
MabI Mph1103I MreI MroI MspCI Nb.BbvCI NcoI
NheI NruI NsiI Nt.BbvCI PacI PalAI PasI
PceI PflFI PI-PspI PI-SceI PmaCI PmlI Ppu21I
PpuMI PshAI Psp5II PspCI PspOMI PspPPI PsrI
PsyI RgaI RigI RruI RsrII Rsr2I SacII
SanDI SexAI SfaAI SfiI Sfr303I SgfI SgrAI
SgrBI SgrDI SgsI SmaI SmiI SnaBI SrfI
SseBI SspBI SstII StuI StyI SwaI TspMI
Tth111I Vha464I XagI XmaI XmaCI XmaJI Zsp2I

pMT/V5-His/lacZ中的单酶切位点包括:

Acc65I AfeI AgeI AhdI BlpI BmgBI Bpu10I
BseRI BsiWI BspQI BssHII BstAPI BstBI BstEII
BstZ17I Bsu36I DraIII Eco53kI EcoO109I EcoRV KasI
KpnI MauBI MfeI MscI NarI NotI PaeR7I
PluTI PmeI PsiI PspXI SacI SalI SapI
SbfI ScaI SfoI SpeI XbaI XhoI

pMT/V5-His/lacZ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

M13 Forward (379-395): 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'

M13 Reverse (4334-4350): 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'

pMT/V5-His/lacZ的全序列信息: D4712 pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D4712-1µg pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 1µg
D4712-100µg pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 100µg
说明书 1份
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-20ºC保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
参考文献:
1. Schneider I. J Embryol Exp Morphol. 1972. 27(2):353-65.
2. Moraes AM, Jorge SA, Astray RM, Suazo CA, Calderón Riquelme CE, et al. Biotechnol Adv. 2012. 30(3):613-28.
3. Kovach MJ, Carlson JO, Beaty BJ. Insect Mol Biol. 1992. 1(1):37-43.
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