pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞(Drosophila Schneider 2)诱导型表达质粒pMT/V5-His A (D4716)，pMT/V5-His B (D4719)和pMT/V5-His C (D4721)的阳性对照质粒。本质粒转染S2果蝇细胞后，可通过β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)或Western Blot测定S2果蝇细胞中由lacZ基因的转录的β-半乳糖苷酶原(β-galactosidase)表达情况，评估S2果蝇细胞的转染效果、重组蛋白表达水平，辅助摸索磷酸钙法转染S2果蝇细胞的最佳条件。

S2果蝇细胞，也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞，源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞，在摇瓶中为悬浮细胞，无需CO₂，可在室温(26-28ºC)培养，生长速度快，细胞密度高，可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白，兼容无血清培养基，已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。

本质粒采用的MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)受重金属离子的(Zn²⁺, Cd²⁺)的严格调控，因此S2果蝇细胞可通过加入CuSO₄或CdCl₂瞬时高效启动外源基因表达。建议使用500-1000μM CuSO₄或10μM CdCl₂诱导外源基因表达。CuSO₄细胞毒性低于CdCl₂，CdCl₂启动效率高于CuSO₄ [3]。

本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞，后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到诱导型表达β-半乳糖苷酶原的S2果蝇稳定细胞株。

本质粒含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH)，便于重组蛋白的检测和纯化。

本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性，可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。

pMT/V5-His/lacZ质粒的图谱如下：

pMT/V5-His/lacZ质粒的主要信息如下：

Base pairs	6554
M13 Forward	379-395
MT promoter	411-833
lacZ	874-3918
MCS (Multiple Cloning Site)	3919-3945
V5 Tag	3946-3987
6X His Tag	3997-4014
SV40 poly (A) signal	4056-4190
M13 Reverse	4334-4350
lac operator	4358-4374
lac promoter	4382-4412
CAP binding site	4427-4448
ori	4736-5324
Ampicillin	5495-6355
Ampicillin promoter	6356-6460

pMT/V5-His/lacZ表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D4712 pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒).pdf

pMT/V5-His/lacZ中没有的酶切位点包括：

AarI	AatI	AbsI	AccIII	AcvI	AflII	AjuI
AloI	Aor13HI	ApaI	AscI	AsiSI	AspI	AspA2I
AsuNHI	AvrII	BamHI	BarI	BbrPI	BbvCI	BfrI
BglII	BlnI	BmtI	BoxI	BplI	BsaAI	BseAI
Bsp13I	Bsp19I	Bsp68I	Bsp120I	Bsp1407I	BspEI	BspOI
BspTI	BsrGI	BssT1I	Bst98I	BstAFI	BstAUI	BstBAI
BstENI	BstPAI	BstSNI	BtuMI	Cfr9I	Cfr42I	CpoI
CsiI	CspI	CspCI	Eco72I	Eco105I	Eco130I	Eco147I
EcoNI	EcoRI	EcoT14I	EcoT22I	ErhI	FalI	FseI
FspAI	I-CeuI	I-PpoI	I-SceI	KflI	Kpn2I	KspI
MabI	Mph1103I	MreI	MroI	MspCI	Nb.BbvCI	NcoI
NheI	NruI	NsiI	Nt.BbvCI	PacI	PalAI	PasI
PceI	PflFI	PI-PspI	PI-SceI	PmaCI	PmlI	Ppu21I
PpuMI	PshAI	Psp5II	PspCI	PspOMI	PspPPI	PsrI
PsyI	RgaI	RigI	RruI	RsrII	Rsr2I	SacII
SanDI	SexAI	SfaAI	SfiI	Sfr303I	SgfI	SgrAI
SgrBI	SgrDI	SgsI	SmaI	SmiI	SnaBI	SrfI
SseBI	SspBI	SstII	StuI	StyI	SwaI	TspMI
Tth111I	Vha464I	XagI	XmaI	XmaCI	XmaJI	Zsp2I

pMT/V5-His/lacZ中的单酶切位点包括：

Acc65I	AfeI	AgeI	AhdI	BlpI	BmgBI	Bpu10I
BseRI	BsiWI	BspQI	BssHII	BstAPI	BstBI	BstEII
BstZ17I	Bsu36I	DraIII	Eco53kI	EcoO109I	EcoRV	KasI
KpnI	MauBI	MfeI	MscI	NarI	NotI	PaeR7I
PluTI	PmeI	PsiI	PspXI	SacI	SalI	SapI
SbfI	ScaI	SfoI	SpeI	XbaI	XhoI

pMT/V5-His/lacZ质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

M13 Forward (379-395): 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'

M13 Reverse (4334-4350): 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'

pMT/V5-His/lacZ的全序列信息: D4712 pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 全序列.txt

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D4712-1µg	pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	1µg
D4712-100µg	pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	100µg
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.首次使用1µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
参考文献：
1. Schneider I. J Embryol Exp Morphol. 1972. 27(2):353-65.
2. Moraes AM, Jorge SA, Astray RM, Suazo CA, Calderón Riquelme CE, et al. Biotechnol Adv. 2012. 30(3):613-28.
3. Kovach MJ, Carlson JO, Beaty BJ. Insect Mol Biol. 1992. 1(1):37-43.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D4701-1µg	pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒)	1µg
D4701-100µg	pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒)	100µg
D4705-1µg	pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒)	1µg
D4705-100µg	pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒)	100µg
D4708-1µg	pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒)	1µg
D4708-100µg	pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒)	100µg
D4712-1µg	pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	1µg
D4712-100µg	pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	100µg
D4716-1µg	pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4716-100µg	pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4719-1µg	pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4719-100µg	pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4721-1µg	pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4721-100µg	pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4724-1µg	pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	1µg
D4724-100µg	pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	100µg
D4727-1µg	pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4727-100µg	pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4732-1µg	pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4732-100µg	pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4735-1µg	pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4735-100µg	pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4739-1µg	pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4739-100µg	pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4742-1µg	pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4742-100µg	pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4745-1µg	pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	1µg
D4745-100µg	pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)	100µg
D4748-1µg	pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	1µg
D4748-100µg	pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒)	100µg
D4751-1µg	pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒)	1µg
D4751-100µg	pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒)	100µg
D4755-1µg	pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒)	1µg
D4755-100µg	pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒)	100µg
D4759-1µg	pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒)	1µg
D4759-100µg	pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒)	100µg