碧云天生产的SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液，即SDS-PAGE One-step Blue Stacking Gel Master Mix，提供了简单而又超快速地配制蓝色SDS-PAGE凝胶(即SDS聚丙烯酰胺凝胶)上层胶所需主要试剂的混合溶液，该混合溶液中包含Tris-HCl (pH6.8)、Acr-Bis (29:1)、可迁移蓝色染料、SDS等[1]。

本产品使用便捷。本上层胶预混液已经把SDS-PAGE凝胶上层胶成分预混合好，使用前仅需加入适量凝胶聚合催化剂(过硫酸铵或其替代物，如Ammonium persulfate substitute (ST005))和TEMED (ST728)即可简单快速地完成上层胶的配制。

本产品适用于一步法配胶，快速高效。本产品优化了配方，灌注下层胶(即分离胶)后，无需液封可直接加入上层胶(又称浓缩胶、堆积胶或积层胶)，一步完成制胶，节约配胶时间。配合碧云天不同浓度的SDS-PAGE一步法下层胶预混液使用效果更佳，轻松超快速完成各种不同浓度SDS-PAGE凝胶的配制。

本产品上层胶为蓝色，指示清晰。本上层胶预混液含迁移性蓝色染料，可使蛋白上样孔一目了然，便于上样，且易于判断上样孔是否歪曲或破损。该蓝色染料电泳时会压缩并向下迁移，直至凝胶最下端或跑出凝胶，电泳后在上层胶中无残留，对电泳、考染、转膜等均无影响。

本产品配制的SDS-PAGE凝胶，具有优良的分离效果。电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，特别是小分子蛋白质条带更清晰。

本产品为4%固定浓度上层胶，如需要配制特殊浓度的上层胶，可以考虑单独购买Acr-Bis (29:1) (ST003)、10% SDS (ST628)、Tris-HCl (pH6.8) (ST768)和PAGE上层胶蓝色染料(500X) (P0701)等进行特殊浓度的SDS-PAGE凝胶蓝色上层胶配制。如果需要无迁移彩色上层胶可以购买SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液(P0906)。

本产品的250ml包装约可配制125-250块常规大小的SDS-PAGE凝胶的上层胶，500ml包装约可配制250-500块常规大小的SDS-PAGE凝胶的上层胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
P0908-250ml	SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液	250ml
P0908-500ml	SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液	500ml
—	说明书	1份

保存条件：

4ºC避光保存，一年有效。

注意事项：

进行上层胶配制时，需要另外准备过硫酸铵或其替代物(ST005)以及TEMED (ST728)。

上层胶预混液长期静置后染料可能会出现沉淀，不影响正常使用，使用前请摇晃均匀。

本产品含有Acr-Bis，对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的下层胶(即分离胶)。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150kDa
8%胶	30-90kDa
10%胶	20-80kDa
12%胶	12-60kDa
15%胶	10-40kDa

2.称取适量过硫酸铵或其替代物(ST005)，用超纯水或其它高纯度的水配制10%溶液。注：过硫酸铵或其替代物配成溶液后容易失效，需注意存放及时间限制。超纯水推荐使用ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。
3.配制一块常用PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所用下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算，上层胶按1.5厘米高度计算，均含约0.3ml的冗余量)参见下表。

凝胶厚度	下层胶体积	上层胶体积
0.75mm	4.0ml	1.0ml
1.0mm	5.4ml	1.5ml
1.5mm	8.0ml	2.0ml

注：下层胶体积已包含适量冗余，请勿全部用于灌制下层胶，以免灌胶时上层胶高度不够。
4.参考下表，下层胶灌注后，在SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液中，按照1%的比例加入相应量的10%过硫酸铵或其替代物溶液，按照0.1%的比例加入相应量的TEMED。例如10ml SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液中，加入100μl 10%过硫酸铵或其替代物溶液和10μl TEMED，适当混匀。可直接将配制好的上层胶混合液紧贴玻璃板均匀轻柔注入，随后小心插入梳子等待凝固，通常10-30分钟内胶会凝固。也可用蒸馏水或异丙醇封住液面，直至下层胶凝固充分后再进行SDS-PAGE上层胶的配制。
注1：本上层胶预混液使用前须摇匀。
注2：一步法直接加入上层胶混合液时一定要轻缓并左右平移加入，而不是集中在一个位置灌制，以免上层胶溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度，建议使用1ml移液器缓慢、均匀、左右平移加入。
注3：一步法直接加入上层胶混合液，上下层胶分界线的平整度可能会稍差于液封法，但不影响后续电泳结果。
注4：具体的凝固时间和温度及光照有关，说明书中10%过硫酸铵或其替代物和TEMED的推荐用量是室温为25ºC时的用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间，当室温低于25ºC时，可以适当同时加大10%过硫酸铵或其替代物和TEMED的用量，例如20ºC时建议用量是正常推荐用量的1.5倍，15ºC时建议用量是正常推荐用量的2倍。

成分	配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(毫升)
SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液	2	3	4	6	8	10
10%过硫酸铵或其替代物	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
TEMED	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

5.配制好的凝胶如果当天不能使用，可以在4ºC保存1-2天后使用，但通常新鲜配制凝胶的电泳效果更佳。
6.具体的电泳及Western实验操作可以参考如下网页：https://www.beyotime.com/support/western.htm。
参考文献：
1.Laemmli UK. Nature. 1970. 227(5259):680-5.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
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P0903S	SDS-PAGE凝胶一步法快速配制试剂盒(红色上层胶)	30-50gels
P0903M	SDS-PAGE凝胶一步法快速配制试剂盒(红色上层胶)	150-250gels
P0906-250ml	SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液	250ml
P0906-500ml	SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液	500ml
P0908-250ml	SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液	250ml
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P0932-250ml	6% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	250ml
P0932-500ml	6% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	500ml
P0935-250ml	8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	250ml
P0935-500ml	8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	500ml
P0937-250ml	10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	250ml
P0937-500ml	10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	500ml
P0941-250ml	12% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	250ml
P0941-500ml	12% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	500ml
P0943-250ml	15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	250ml
P0943-500ml	15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液	500ml
P0012A	SDS-PAGE凝胶配制试剂盒	可制30-50块胶
P0012AC	SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒	可制30-50块胶
P0670-250ml	10% SDS-PAGE下层胶预混液	250ml
P0670-500ml	10% SDS-PAGE下层胶预混液	500ml
P0672-250ml	12% SDS-PAGE下层胶预混液	250ml
P0672-500ml	12% SDS-PAGE下层胶预混液	500ml
P0675-250ml	15% SDS-PAGE下层胶预混液	250ml
P0675-500ml	15% SDS-PAGE下层胶预混液	500ml
P0676-250ml	6% SDS-PAGE下层胶预混液	250ml
P0676-500ml	6% SDS-PAGE下层胶预混液	500ml
P0678-250ml	8% SDS-PAGE下层胶预混液	250ml
P0678-500ml	8% SDS-PAGE下层胶预混液	500ml
P0683-250ml	SDS-PAGE上层胶预混液	250ml
P0683-500ml	SDS-PAGE上层胶预混液	500ml
P0686	6% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒	可制30-50块胶
P0688	8% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒	可制30-50块胶
P0690	10% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒	可制30-50块胶
P0692	12% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒	可制30-50块胶
P0695	15% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒	可制30-50块胶
P0701-0.2ml	PAGE上层胶蓝色染料(500X)	0.2ml
P0701-1ml	PAGE上层胶蓝色染料(500X)	1ml
P0705-0.2ml	PAGE上层胶红色染料(500X)	0.2ml
P0705-1ml	PAGE上层胶红色染料(500X)	1ml
P0712-0.2ml	PAGE上层胶红色染料(500X, 无迁移)	0.2ml
P0712-1ml	PAGE上层胶红色染料(500X, 无迁移)	1ml