8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液
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产品编号 P0935-500ml
数量
¥ 258.00
产品包装:
250ml 500ml
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碧云天生产的6%、8%、10%、12%和15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液,即SDS-PAGE One-step Resolving Gel Master Mix,提供了简单而又超快速地配制相应浓度SDS-PAGE凝胶(即SDS聚丙烯酰胺凝胶)下层胶所需主要试剂的混合溶液,该混合溶液中包含Tris-HCl (pH8.8)、Acr-Bis (29:1)、SDS等[1]。

本产品使用便捷。本下层胶预混液已经把SDS-PAGE凝胶下层胶成分预混合好,使用前仅需加入适量凝胶聚合催化剂(过硫酸铵或其替代物,如Ammonium persulfate substitute (ST005))和TEMED (ST728)即可简单快速地完成下层胶的配制。

本产品适用于一步法配胶,快速高效。本产品优化了配方,灌注下层胶(即分离胶)后,无需液封可直接加入上层胶(又称浓缩胶、堆积胶或积层胶),一步完成制胶,节约配胶时间。配合碧云天SDS-PAGE一步法红色或蓝色上层胶预混液(P0906/P0908)使用效果更佳,轻松超快速完成相应浓度SDS-PAGE凝胶的配制。也可以直接选购相应浓度SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) (P0912/P0915/P0917/P0919/P0921),使用更方便。

本产品配制的SDS-PAGE凝胶,具有优良的分离效果。电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利,特别是小分子蛋白质条带更清晰。

碧云天生产的SDS-PAGE一步法下层胶预混液系列产品有6%、8%、10%、12%和15%共5种常见浓度供您选择,如需要配制其它浓度凝胶,可以考虑购买SDS-PAGE凝胶一步法快速配制试剂盒(红色上层胶) (P0903)、SDS-PAGE凝胶一步法配制试剂盒(红色上层胶) (P0901),或单独购买Acr-Bis (29:1) (ST003)、10% SDS (ST628)和Tris-HCl (pH8.8) (ST788)等进行各种不同浓度SDS-PAGE凝胶的配制。

本产品的250ml包装约可配制30-60块常规大小的相应浓度SDS-PAGE凝胶的下层胶,500ml包装约可配制60-120块常规大小的相应浓度SDS-PAGE凝胶的下层胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0935-250ml 8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0935-500ml 8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC避光保存,一年有效。

注意事项:

进行下层胶配制时,需要另外准备过硫酸铵或其替代物(ST005)以及TEMED (ST728)。

本产品含有Acr-Bis,对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.根据目的蛋白的分子量大小选择合适浓度的SDS-PAGE的下层胶(即分离胶)。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下:
SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
6%胶 50-150kDa
8%胶 30-90kDa
10%胶 20-80kDa
12%胶 12-60kDa
15%胶 10-40kDa
2.称取适量过硫酸铵或其替代物,如ST005,用超纯水或其它高纯度的水配制10%溶液。过硫酸铵或其替代物配成溶液后容易失效,需注意存放及时间限制。超纯水推荐使用ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。
3.配制一块常用PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算,上层胶按1.5厘米高度计算,均含约0.3ml的冗余量)参见下表。
凝胶厚度 下层胶体积 上层胶体积
0.75mm 4.0ml 1.0ml
1.0mm 5.4ml 1.5ml
1.5mm 8.0ml 2.0ml
注:下层胶体积已包含适量冗余,请勿全部用于灌制下层胶,以免灌胶时上层胶高度不够。
4.参考下表,在相应浓度的SDS-PAGE一步法下层胶预混液中,按照1%的比例加入相应量的10%过硫酸铵或其替代物溶液,按照0.04%的比例加入相应量的TEMED。例如10ml 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液中,加入100μl 10%过硫酸铵或其替代物溶液和4μl TEMED,适当混匀后倒入到制胶模具中。本下层胶灌注后,无需等待凝固,可直接将配制好的上层胶混合液紧贴玻璃板均匀轻柔注入,随后小心插入梳子等待凝固。上层胶可以自行配制或者选用碧云天的SDS-PAGE一步法红色或蓝色上层胶预混液(P0906/P0908)进行配制。也可用蒸馏水或异丙醇封住液面,直至下层胶凝固充分后再进行SDS-PAGE上层胶的配制。通常10-30分钟内胶会凝固。
注1:一步法直接加入上层胶时建议配制4%的上层胶以达到更好的分层效果,也可根据需求自行配制不同浓度的上层胶。
注2:一步法直接加入上层胶混合液时一定要轻缓并左右平移加入,而不是集中在一个位置灌制,以免上层胶溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度,建议使用1ml移液器缓慢、均匀、左右平移加入。
注3:一步法直接加入上层胶混合液,上下层胶分界线的平整度可能会稍差于液封法,但不影响后续电泳结果。
注4:具体的凝固时间和温度及光照有关,说明书中10%过硫酸铵或其替代物和TEMED的推荐用量是室温为25ºC时的用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当同时加大10%过硫酸铵或其替代物和TEMED的用量,例如20ºC时建议用量是正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议用量是正常推荐用量的2倍。
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
SDS-PAGE一步法下层胶预混液 5 10 15 20 30 50
10%过硫酸铵或其替代物 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
5.配制好的凝胶如果当天不能使用,可以在4ºC保存1-2天后使用,但通常新鲜配制凝胶的电泳效果更佳。
6.具体的电泳及Western实验操作可以参考如下网页:https://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Laemmli UK. Nature. 1970. 227(5259):680-5.
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