15% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶)
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产品编号 P0921S
数量
¥ 259.00
产品包装:
125gels
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碧云天生产的6%、8%、10%、12%和15% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶),即SDS-PAGE Gel One-step Super Quick Preparation Kit (Red Stacking Gel),提供了简单而又超快速地配制相应浓度SDS-PAGE凝胶(即SDS聚丙烯酰胺凝胶)所需的所有试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制Tris-HCl缓冲系统的相应浓度的SDS-PAGE凝胶[1]。

本试剂盒使用便捷。本试剂盒将SDS-PAGE凝胶配制所需试剂混合成下层胶预混液和上层胶预混液,使用前仅需加入适量10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute,混匀后即可灌胶。

本试剂盒使用一步法配胶,快速高效。本试剂盒优化了配方,灌注下层胶(即分离胶)后,无需液封可直接加入上层胶(又称浓缩胶、堆积胶或积层胶),一步完成制胶,节约配胶时间。

本试剂盒上层胶为红色,指示清晰。本试剂盒的SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液含电泳时无迁移红色染料,可使蛋白上样孔一目了然,便于上样,且易于判断上样孔是否歪曲或破损。该红色染料可以稳定存在于上层胶中,不会随着电泳进入下层胶,不影响电泳和染色效果,有助于电泳后辨别并切除上层胶,便于后续转膜等实验的进行。

本试剂盒配制的SDS-PAGE凝胶,具有优良的分离效果。电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利,特别是小分子蛋白质条带更清晰。

碧云天生产的SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶)系列产品的上层胶浓度为4%,下层胶有6%、8%、10%、12%和15%共5种常见浓度供您选择,也可以考虑选购可以配制各种不同浓度SDS-PAGE凝胶的SDS-PAGE凝胶一步法快速配制试剂盒(红色上层胶) (P0903)。

本试剂盒约可配制125块厚度为0.75mm的常规大小SDS-PAGE胶(也称mini胶)。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0921S-1 15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0921S-2 SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液 125ml
P0921S-3 凝胶聚合催化剂 1g
P0921S-4 TEMED Substitute 1ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,一年有效。两种预混液及TEMED Substitute均需4ºC避光保存。凝胶聚合催化剂更宜室温保存,4ºC保存时需拧紧瓶盖注意防潮,受潮后会很快失效。凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC保存,通常半年内有效。

注意事项:

凝胶聚合催化剂配制成10%溶液后,应当-20ºC保存,推荐使用超纯水配制。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。凝胶聚合催化剂每次应适量配制,并尽量使用新鲜配制的10%凝胶聚合催化剂溶液。超纯水推荐使用ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。

SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液长期静置后染料可能会出现沉淀,不影响正常使用,使用前请摇晃均匀。

TEMED Substitute易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

下层胶预混液和上层胶预混液中含有Acr-Bis,对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

TEMED Substitute易燃,有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其它物品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.根据目的蛋白的分子量大小选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶(即分离胶)。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下:
SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
6%胶 50-150kDa
8%胶 30-90kDa
10%胶 20-80kDa
12%胶 12-60kDa
15%胶 10-40kDa
2.称取适量凝胶聚合催化剂,用超纯水或其它高纯度的水配制10%凝胶聚合催化剂溶液。例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用超纯水溶解并定容到1ml,即为10%凝胶聚合催化剂溶液。注:凝胶聚合催化剂溶液容易失效,建议分装后置于-20ºC保存,通常半年内有效。超纯水推荐使用ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。
3.配制一块常用PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算,上层胶按1.5厘米高度计算,均含约0.3ml的冗余量)参见下表。
凝胶厚度 下层胶体积 上层胶体积
0.75mm 4.0ml 1.0ml
1.0mm 5.4ml 1.5ml
1.5mm 8.0ml 2.0ml
注:下层胶体积已包含适量冗余,请勿全部用于灌制下层胶,以免灌胶时上层胶高度不够。
4.参考下表,在相应浓度的SDS-PAGE下层胶预混液中,按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液,按照0.04%的比例加入相应量的TEMED Substitute。例如10ml 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液中,加入100μl 10%凝胶聚合催化剂溶液和4μl TEMED Substitute。适当混匀后倒入到制胶模具中,无须等待下层胶凝固,可直接注入配制好的上层胶混合液。也可以用蒸馏水或异丙醇封住液面,直至下层胶充分凝固,通常10-30分钟内胶会凝固。
注:具体的凝固时间和温度及光照有关,说明书中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的推荐用量是室温为25ºC时的用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当同时加大10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20ºC时建议用量是正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议用量是正常推荐用量的2倍。
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
SDS-PAGE一步法下层胶预混液 5 10 15 20 30 50
10%凝胶聚合催化剂溶液 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED Substitute 0.002 0.004 0.008 0.008 0.012 0.02
5.参考下表,在SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液中,按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液,按照0.1%的比例加入相应量的TEMED Substitute。例如10ml SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液中,加入100μl 10%凝胶聚合催化剂溶液和10μl TEMED Substitute,适当混匀。可在下层胶灌注后,直接将配制好的SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液紧贴玻璃板均匀轻柔注入到下层胶上,随后小心插入梳子等待凝固。
如果进行了液封,需去除下层胶上面覆盖的液体,尽量去干净,然后倒入配制好的SDS-PAGE一步法上层胶预混液,插入梳子等待凝固。待上层胶凝固后,即可进行后续的电泳实验。
注1:SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液使用前须摇匀。
注2:一步法直接加入上层胶混合液时一定要轻缓并左右平移加入,而不是集中在一个位置灌制,以免上层胶溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度,建议使用1ml移液器缓慢、均匀、左右平移加入。
注3:一步法直接加入上层胶混合液,上下层胶分界线的平整度可能会稍差于液封法,但不影响后续电泳结果。
成分 配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(毫升)
SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液 2 3 4 6 8 10
10%凝胶聚合催化剂溶液 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
TEMED Substitute 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01
6.配制好的凝胶如果当天不能使用,可在4ºC保存1-2天后使用,但通常新鲜配制凝胶的电泳效果更佳。
7.具体的电泳及Western实验操作可以参考如下网页:https://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Laemmli UK. Nature. 1970. 227(5259):680-5.
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产品编号 产品名称 包装
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P0906-250ml SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液 250ml
P0906-500ml SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液 500ml
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P0919S 12% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0921S 15% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0932-250ml 6% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0932-500ml 6% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0935-250ml 8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0935-500ml 8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0937-250ml 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0937-500ml 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0941-250ml 12% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0941-500ml 12% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0943-250ml 15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0943-500ml 15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0012A SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 可制30-50块胶
P0012AC SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0670-250ml 10% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0670-500ml 10% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0672-250ml 12% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0672-500ml 12% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0675-250ml 15% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0675-500ml 15% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0676-250ml 6% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0676-500ml 6% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0678-250ml 8% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0678-500ml 8% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
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P0701-1ml PAGE上层胶蓝色染料(500X) 1ml
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