重组SENPEUH蛋白酶(His-tag)
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产品编号 P2314-500U
数量
¥ 321.00
产品包装:
500U 2KU 10KU 50KU
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碧云天生产的重组SENPEUH蛋白酶(His-tag),即Recombinant SENPEUH (His-tag)或rSENPEUH (His-tag),是一种通过E. coli 重组表达经人工改造的新型SENP蛋白酶,理论分子量为25.7kDa,主要用于切除酵母或真核细胞体系融合表达的重组蛋白的SUMOEU1标签。

SUMOEU1标签作为SUMO的突变体,在酵母和真核细胞中可以提高目的蛋白的可溶性和稳定性,而且SUMOEU1标签融合的目的蛋白不参于SUMO相关的细胞调控,也不会被内源性的去SUMO化酶切割,因此SUMOEU1标签适用于酵母和真核细胞重组蛋白的表达和纯化。rSENPEUH高度特异性地识别并切割SUMOEU1标签,实现SUMOEU1标签与目的蛋白的高效分离,切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留[1]。

本产品N端带有His-tag,可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。

本产品酶切SUMOEU1标签融合蛋白的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) (P2314)酶切SUMOEU1-MBP蛋白的效果图。在30μl反应体系中,加入10µg SUMOEU1-MBP及相应量的本品,25℃孵育1小时后,加入7μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015),95℃加热5分钟,使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0520)进行电泳检测,BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)进行染色,可以观察到随着重组SENPEUH蛋白酶的酶量增加,SUMOEU1-MBP被酶切的越来越完全。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

本产品的基本信息如下表:

蛋白信息(About this protein)
名称(Name) 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag)
别名(Synonyms) SENP1EU, SENPEU, rSENPEUH
分子量(kDa) 25.7kDa
外观(Physical appearance) 液体
活性(Biological activity) 10U/μl
活力单位(Unit definition) One unit is defined as the amount of enzyme required to digest 10µg of SUMOEU1-MBP protein in 1 hour at 25℃, to the extent that the accumulation of SUMOEU1 tag and MBP as determined by SDS-PAGE.
纯度(Purity) ≥95% by SDS-PAGE, other protease activity not detected.
储存液(Storage buffer) 5mM Tris (pH7.4), 250mM NaCl, 5mM DTT, 50% Glycerol
产品用途(Applications) 切除酵母或真核细胞体系等融合表达的重组蛋白的SUMOEU1标签。

rSENPEUH最佳酶切温度为25℃,在较宽的pH范围(6.0-10.0)、较宽的温度范围(2-37℃)、较宽的离子强度范围(0-1M NaCl,0-500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中,建议4℃酶切过夜以尽可能保持重组蛋白的活性。rSENPEUH在0.5-2mM DTT存在的情况下酶活性更高,建议酶切体系中加入适当浓度的DTT以提高酶切效率。

rSENPEUH的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor)如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-4、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等,可以显著抑制rSENPEUH的酶活力。

本产品用于移除重组蛋白SUMOEU1标签的酶切反应时,如果按照100μg SUMOEU1标签融合的重组蛋白使用1μl rSENPEUH (10U/μl),并4℃酶切过夜,本产品的500U、2KU、10KU和50KU包装,分别可用于约5mg、20mg、100mg和500mg带有SUMOEU1标签融合重组蛋白的酶切。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P2314-500U rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) 50μl
P2314-2KU rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) 200μl
P2314-10KU rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) 1ml
P2314-50KU rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) 1ml×5
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,两年有效。

注意事项:

本产品含50%甘油,-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存,冻融可能会降低本产品的酶活性。

本产品较为粘稠,吸取时需注意取样量准确,加样后请注意充分吹打混匀,避免产生气泡。

本产品的酶活性与SUMOEU1标签和目的蛋白形成的融合蛋白的空间结构有较大的相关性,实测对于一些SUMOEU1标签融合蛋白的活性可以达到说明书标注的活性,但对于某些SUMOEU1标签融合蛋白的酶切活性会差别比较大。对于遇到本产品酶活性相对较低的情况,需要大幅度加大酶的用量。如果希望获得更高的酶切活性,此时建议在许可的范围内适当增减或变更目的蛋白与SUMOEU1标签连接处的氨基酸序列,以获得更好的酶切效果。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.酶切条件的优化。
由于不同SUMOEU1标签融合的重组蛋白具有不同的特性,为获得比较理想的实验效果,建议对酶和待酶切的SUMOEU1标签融合蛋白的使用比例进行适当优化,按照如下步骤摸索rSENPEUH的理想用量。
a.取1μl rSENPEUH (10U/μl)加入到9μl Reaction Buffer (需用户自备)中,将rSENPEUH稀释至1U/μl。
注:由于rSENPEUH在较宽的pH范围(6.0-10.0),较宽的温度范围(2-37℃),较宽的离子强度范围(0-1M NaCl,0-500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性,因此对Reaction Buffer组分不作特定限制,但是在0.5-2mM DTT存在的情况下rSENPEUH的酶活性更高,可根据实验需要决定酶切体系中是否加入适当浓度的DTT。
b.请参考下表在1.5ml离心管中配制反应体系。
Component Volume
SUMOEU1-tag Protein (10μg) xμl
rSENPEUH (1U/μl) 0, 1, 5 or 10μl
Reaction Buffer To 20μl
c.进行酶切反应。温度与时间可以视情况进行适当调整,具体请参考下表。
Temperature Time
4℃ overnight
16℃ 4h
25℃ 2h
37℃ 1h
d.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0520)进行电泳检测并使用考马斯亮蓝(P0017F)染色
e.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,SUMOEU1标签被完全切除是比较理想的rSENPEUH酶用量,可按照等比例放大应用到后续的酶切反应中。
f.如按照上述操作,SUMOEU1标签没有被完全切除,可以尝试增加rSENPEUH酶用量,延长酶切时间或提高酶切温度,以获得最佳的酶切效果。
2.酶切与纯化。
后续可以按照上述优化的反应条件,放大反应体系进行目的蛋白SUMOEU1标签的切除反应。反应结束后,可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMOEU1标签,以及带有His标签的本产品重组SUMOEU1蛋白酶,从而获得高纯度的去除了SUMOEU1标签的目的蛋白。也可以对于同时带有His标签的SUMOEU1标签的融合表达蛋白进行在柱酶切,即在镍柱或GST柱结合带有His标签的SUMOEU1标签的融合蛋白时,进行rSENPEUH (His-tag)的酶切,酶切后如果镍柱容量足够,rSENPEUH (His-tag)和酶切下来的带有His标签的SUMOEU1标签都会结合在镍柱上,仅目的蛋白会被洗脱下来。
参考文献:
1.Vera Rodriguez A, Frey S, Görlich D. J Cell Biol. 2019. 218(6):2006-2020.
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D2975-1μg pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-Neo (Avi标签质粒) 1μg
D2975-100μg pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-Neo (Avi标签质粒) 100μg
D2977-1μg pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-MCS-IRES-BirA(生物素标记质粒) 1μg
D2977-100μg pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-MCS-IRES-BirA(生物素标记质粒) 100μg
D2979-1μg pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi (Avi标签质粒) 1μg
D2979-100μg pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi (Avi标签质粒) 100μg
D2981-1μg pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒) 1μg
D2981-100μg pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒) 100μg
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