碧云天生产的重组SENPEUH蛋白酶(His-tag),即Recombinant SENPEUH (His-tag)或rSENPEUH (His-tag),是一种通过E. coli 重组表达经人工改造的新型SENP蛋白酶,理论分子量为25.7kDa,主要用于切除酵母或真核细胞体系融合表达的重组蛋白的SUMOEU1标签。
SUMOEU1标签作为SUMO的突变体,在酵母和真核细胞中可以提高目的蛋白的可溶性和稳定性,而且SUMOEU1标签融合的目的蛋白不参于SUMO相关的细胞调控,也不会被内源性的去SUMO化酶切割,因此SUMOEU1标签适用于酵母和真核细胞重组蛋白的表达和纯化。rSENPEUH高度特异性地识别并切割SUMOEU1标签,实现SUMOEU1标签与目的蛋白的高效分离,切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留[1]。
本产品N端带有His-tag,可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。
本产品酶切SUMOEU1标签融合蛋白的效果参考图1。
图1. 碧云天生产的重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) (P2314)酶切SUMOEU1-MBP蛋白的效果图。在30μl反应体系中,加入10µg SUMOEU1-MBP及相应量的本品,25℃孵育1小时后,加入7μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015),95℃加热5分钟,使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0520)进行电泳检测,BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)进行染色,可以观察到随着重组SENPEUH蛋白酶的酶量增加,SUMOEU1-MBP被酶切的越来越完全。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
本产品的基本信息如下表:
蛋白信息(About this protein) | |
名称(Name) | 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) |
别名(Synonyms) | SENP1EU, SENPEU, rSENPEUH |
分子量(kDa) | 25.7kDa |
外观(Physical appearance) | 液体 |
活性(Biological activity) | 10U/μl |
活力单位(Unit definition) | One unit is defined as the amount of enzyme required to digest 10µg of SUMOEU1-MBP protein in 1 hour at 25℃, to the extent that the accumulation of SUMOEU1 tag and MBP as determined by SDS-PAGE. |
纯度(Purity) | ≥95% by SDS-PAGE, other protease activity not detected. |
储存液(Storage buffer) | 5mM Tris (pH7.4), 250mM NaCl, 5mM DTT, 50% Glycerol |
产品用途(Applications) | 切除酵母或真核细胞体系等融合表达的重组蛋白的SUMOEU1标签。 |
rSENPEUH最佳酶切温度为25℃,在较宽的pH范围(6.0-10.0)、较宽的温度范围(2-37℃)、较宽的离子强度范围(0-1M NaCl,0-500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中,建议4℃酶切过夜以尽可能保持重组蛋白的活性。rSENPEUH在0.5-2mM DTT存在的情况下酶活性更高,建议酶切体系中加入适当浓度的DTT以提高酶切效率。
rSENPEUH的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor)如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-4、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等,可以显著抑制rSENPEUH的酶活力。
本产品用于移除重组蛋白SUMOEU1标签的酶切反应时,如果按照100μg SUMOEU1标签融合的重组蛋白使用1μl rSENPEUH (10U/μl),并4℃酶切过夜,本产品的500U、2KU、10KU和50KU包装,分别可用于约5mg、20mg、100mg和500mg带有SUMOEU1标签融合重组蛋白的酶切。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2314-500U | rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) | 50μl |
P2314-2KU | rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) | 200μl |
P2314-10KU | rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) | 1ml |
P2314-50KU | rSENPEUH (His-tag, 10U/μl) | 1ml×5 |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存,两年有效。
注意事项:本产品含50%甘油,-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存,冻融可能会降低本产品的酶活性。
本产品较为粘稠,吸取时需注意取样量准确,加样后请注意充分吹打混匀,避免产生气泡。
本产品的酶活性与SUMOEU1标签和目的蛋白形成的融合蛋白的空间结构有较大的相关性,实测对于一些SUMOEU1标签融合蛋白的活性可以达到说明书标注的活性,但对于某些SUMOEU1标签融合蛋白的酶切活性会差别比较大。对于遇到本产品酶活性相对较低的情况,需要大幅度加大酶的用量。如果希望获得更高的酶切活性,此时建议在许可的范围内适当增减或变更目的蛋白与SUMOEU1标签连接处的氨基酸序列,以获得更好的酶切效果。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Component | Volume |
SUMOEU1-tag Protein (10μg) | xμl |
rSENPEUH (1U/μl) | 0, 1, 5 or 10μl |
Reaction Buffer | To 20μl |
Temperature | Time |
4℃ | overnight |
16℃ | 4h |
25℃ | 2h |
37℃ | 1h |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2312S | SUMO Protease | 200U |
P2312M | SUMO Protease | 1000U |
P2312L | SUMO Protease | 5000U |
P2313-500U | 重组SENP2蛋白酶(His-tag) | 500U |
P2313-2KU | 重组SENP2蛋白酶(His-tag) | 2KU |
P2313-10KU | 重组SENP2蛋白酶(His-tag) | 10KU |
P2313-50KU | 重组SENP2蛋白酶(His-tag) | 50KU |
P2314-500U | 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) | 500U |
P2314-2KU | 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) | 2KU |
P2314-10KU | 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) | 10KU |
P2314-50KU | 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) | 50KU |
D2975-1μg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-Neo (Avi标签质粒) | 1μg |
D2975-100μg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-Neo (Avi标签质粒) | 100μg |
D2977-1μg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-MCS-IRES-BirA(生物素标记质粒) | 1μg |
D2977-100μg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-MCS-IRES-BirA(生物素标记质粒) | 100μg |
D2979-1μg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi (Avi标签质粒) | 1μg |
D2979-100μg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi (Avi标签质粒) | 100μg |
D2981-1μg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 1μg |
D2981-100μg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 100μg |