SUMO Protease
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产品编号 P2312L
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¥ 3282.00
产品包装:
200U 1000U 5000U
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碧云天生产的SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease),是一种重组表达的高度特异性识别SUMO化修饰或SUMO结构域,并水解SUMO羧基端(C端) x-Gly-Gly-x肽段中Gly-Gly后的肽键,从而去除SUMO化修饰或者去除SUMO融合表达蛋白中SUMO结构域的蛋白酶。本产品是一种来自Saccharomyces cerevisiae的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白。

SUMO是一种泛素样蛋白(Ubiquitin-like Protein),是一种非常常见蛋白翻译后修饰(post-translation modification, PTM),对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。

SUMO也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化,例如碧云天的D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO质粒就是一种在N端同时表达His标签和SUMO标签的原核表达质粒。将SUMO作为标签和目的蛋白的氨基端(N端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠,提高目的蛋白的可溶性和产量。随后使用SUMO Protease对SUMO融合蛋白进行酶切,去除SUMO标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。因此SUMO Protease可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO标签,从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。

SUMO Protease进行酶切时的最适pH值为8.0,最佳酶切温度为30℃。但SUMO Protease在较宽的pH范围(6.0-10.0)在较宽的温度范围(2~30℃),较宽的离子强度范围(0-400mM NaCl)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中,为尽量保持目的蛋白的结构和生物活性,建议在4℃用SUMO Protease酶切过夜。SUMO Protease在还原剂DTT(0.5~2mM)存在的情况下酶切活性更高,酶切体系中加入适当浓度DTT可以显着提高酶切效率,尤其是在长时间的酶切过程中,例如4ºC酶切过夜。

推荐使用带有His/SUMO双标签的碧云天研发生产的原核表达质粒pET-N-His-PreScission-SUMO (D2918)用于融合蛋白的构建,在使用镍柱纯化介质(BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)和BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐变性剂型) (P2233))纯化带有His/SUMO双标签的融合蛋白后,使用SUMO Protease可以将His和SUMO标签同时切除,而目的蛋白的N端可以不残留任何额外的氨基酸残基。碧云天生产的SUMO Protease因为带有His标签,也可以和融合蛋白的His-SUMO标签一起通过与镍柱结合而非常方便地一起去除。

活性定义:One unit of SUMO Protease cleaves ≥85% of 2μg control substrate in 1 h at 30 ℃。

碧云天生产的SUMO Protease酶活性鉴定结果可参考图1。

图1. 碧云天SUMO Protease酶切带有SUMO标签的目的蛋白的效果图。每个样品纯化的SUMO融合蛋白2µg,SUMO Protease的用量从左至右依次为0、0.125、0.25、0.5、1和2U,30℃酶切反应1h后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。图A使用的酶切缓冲液为1X SUMO Protease Buffer + Salt,图B使用的酶切缓冲液为1X SUMO Protease Buffer - Salt。

来源:碧云天生产的SUMO Protease通过大肠杆菌重组、表达和纯化而获得,纯度≥95%。

酶储存溶液:25mM Tris-HCl (pH 8.0), 250mM NaCl, 0.1% Igepal, 0.5mM DTT, 50% (v/v) glycerol。

10X SUMO Protease Buffer - Salt:500mM Tris-acetate, 2% Igepal, 10mM DTT, pH 8.0 at 25℃。

10X SUMO Protease Buffer + Salt:500mM Tris-acetate, 1.5M NaCl, 2% Igepal, 10mM DTT, pH 8.0 at 25℃。

本产品200U、1000U和5000U包装,分别可用于约0.4mg、2mg和10mg带有SUMO标签的融合蛋白的酶切。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P2312S-1 SUMO Protease (10U/µl) 20µl
P2312S-2 10X SUMO Protease Buffer + Salt 400µl
P2312S-3 10X SUMO Protease Buffer – Salt 400µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2312M-1 SUMO Protease (10U/µl) 100µl
P2312M-2 10X SUMO Protease Buffer + Salt 2ml
P2312M-3 10X SUMO Protease Buffer – Salt 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2312L-1 SUMO Protease (10U/µl) 500µl
P2312L-2 10X SUMO Protease Buffer + Salt 10ml
P2312L-3 10X SUMO Protease Buffer – Salt 10ml
说明书 1份
保存条件:

-80℃保存,至少一年有效。须注意避免反复冻融。

注意事项:

为获得最好的酶切效果,须保证待酶切的重组蛋白为完全纯化的蛋白。

对于大部分融合蛋白,SUMO Protease最理想的反应缓冲液液中NaCl的浓度为150mM。根据实际情况可在0~300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的酶切效果。

融合蛋白酶切反应中咪唑的终浓度不应高于150mM,否则可能会影响SUMO Protease的酶切效率。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.酶切条件的优化。由于不同目的蛋白具有不同的特性,所以在实际使用时,建议对酶和待酶切的目的蛋白的比例进行适当优化,以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。
a. 按下表在1.5ml离心管中配置反应体系(以20μl体系为例,无盐和有盐的缓冲液可任选一种,或两种同时做平行实验):
Component Volume (μl)
H2O X
10X Reaction Buffer –/+ Salt 20
SUMO-tag Protein (20μg) Y
SUMO Protease (10U/µl) 0, 0.5 or 1
Total 200

注:如果带有SUMO标签的目的蛋白浓度为5μg/μl,那么Y = 20/5 = 4,即须使用4μl 5μg/μl的目的蛋白。
b.将反应混合物放置于30ºC反应1、2、4或6h。如果目的蛋白在30ºC不太稳定,可以考虑4ºC反应过夜(16h左右)。正常情况下按照上述反应体系,无论30ºC反应1h还4ºC反应16h,应该都可以充分剪切并去除SUMO标签的。
c. 带有SUMO标签的目的蛋白酶切反应的温度与时间,可以视情况进行适当调整,具体参考如下表格。
反应温度 反应时间
4℃ 15-16h
16℃ 4h
25℃ 1.5h
30℃ 1h

d.取20µl样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中,如果有必要,还可以在上述反应的不同时间点取少量样品,后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。
注:如果目的蛋白要求低温,可将反应体系置于4℃,延长反应时间,并适当增加SUMO Protease用量,以确保酶切效果。
2.酶切与纯化。后续可以按照上述优化的反应条件,放大反应体系进行目的蛋白SUMO标签的切除反应。反应结束后,可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMO标签,以及带有His标签的本产品SUMO Protease,从而获得高纯度的去除了SUMO标签的目的蛋白。
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