碧云天生产的WELQ Protease,也称WELQut Protease、WELQ蛋白酶或WELQut蛋白酶,是碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组蛋白酶。WELQ蛋白酶能特异性地识别四肽序列Trp-Glu-Leu-Gln (W-E-L-Q),并对Gln (Q)之后的肽键进行酶切,常用于重组蛋白除去His或者其它融合标签,其最突出优势是酶切后不会在目的蛋白的N端留下任何额外的氨基酸残基。
本WELQ蛋白酶反应条件比较宽泛。WELQ蛋白酶是一种源自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的丝氨酸蛋白酶类似蛋白(Serine protease-like proteins) [1,2],该蛋白酶反应时不需要特殊的反应缓冲液,能在比较宽泛的温度区间(4-30℃)及pH区间(6.5-9.0)识别WELQ多肽序列,并在Gln (Q)之后进行蛋白或多肽的剪切。
本WELQ蛋白酶能适用于His标签蛋白的柱上酶切。本WELQ蛋白酶带有His标签,特别适用于His标签蛋白的柱上酶切。在切割His标签蛋白的时候,切下的His标签和WELQ蛋白酶可结合于His纯化柱(His-tag Purification Resin)上,而目的蛋白在穿透液中,这样洗脱下来的蛋白中理论上就不会含有His标签和WELQ蛋白酶,极大地方便了目的蛋白的纯化。如果不进行柱上酶切,分别过镍柱和能除去目的蛋白融合标签的纯化柱也可以方便地去除WELQ蛋白酶和目的蛋白上切割下来的标签。
碧云天的WELQ Protease活性鉴定结果可参考图1。
图1. 碧云天的WELQ Protease (P2311)与T公司同类产品(Competitor)切割GST标签融合蛋白(WELQ四氨基酸序列位于GST和10kD目的蛋白之间)的效果图。将含有WELQ Protease识别位点的36kD GST标签融合蛋白与WELQ Protease进行反应,底物的用量为50μg,酶的用量分别为1U和2U,在50mM Tris-HCl (pH8.0)的缓冲液中反应,设置4℃与25℃两种反应温度,在反应0、1、3、6小时以及过夜(Overnight, O/N) (超过16小时)后取样,进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约10kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。如图所示,本产品与T公司(Competitor)的WELQ蛋白酶具有相当的活性。实际效果会因样品种类、检测条件等不同而存在差异,本图仅供参考。
WELQ Protease分子量大小约22kDa,纯度≥95%。不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。
酶活性单位定义: The amount of enzyme required to cleave ≥99% of 100µg of a control protein in 16h at 20℃.
WELQ Protease储存液组成为:10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4,140mM NaCl,2.7mM KCl,50% (v/v) Glycerol,pH7.3。
WELQ Protease的酶切体系中可以兼容0.01-1% Triton X-100/Tween-80,5-50mM DTT,100mM NaCl,20-300mM Imidazole,100mM Tris-HCl (pH8.0),100mM Na3PO4 (pH7.4),20mM K3PO4 (pH7.4)。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2311S | WELQ Protease (5U/μl) | 500U |
P2311M | WELQ Protease (5U/μl) | 2500U |
P2311L | WELQ Protease (5U/μl) | 10kU |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存,至少两年有效。
注意事项:2M尿素、0.25M盐酸胍会抑制WELQ Protease的部分酶活性。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Component | Amount |
Target Protein | 50μg |
WELQ Protease (5U/μl)* | 0.5/1/2/10U |
Reaction Buffer** | To 50μl |