pTac-GST-WELQ
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产品编号 D5005-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pTac-GST-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端含有GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)融合蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有WELQ Protease (P2311)酶切位点,可通过WELQ Protease切除N端的GST标签。

本质粒含有Tac启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。

本质粒在N端GST标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的GST标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。

通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)检测和少量地分离纯化目的蛋白。

本质粒为氨苄青霉素抗性。

pTac-GST-WELQ质粒(4983bp)的图谱如下:

pTac-GST-WELQ质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
tac promoter 183-211
lac operator 219-235
GST tag coding sequence 258-911
WELQ site 930-941
Multiple cloning site (PstI-NotI) 936-980
AmpR promoter 1286-1390
Ampicillin resistance ORF 1391-2251
pBR322 origin 2422-3010
lacI promoter 3254-3331
lacI coding sequence 3332-4414
lac promoter 4463-4493
lac operator 4501-4517
M13 reverse primer (M13 rev) 4525-4541
lacZα 4537-81
M13 forward primer (M13 fwd) 4557-4573

pTac-GST-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5005 pTac-GST-WELQ.pdf

pTac-GST-WELQ中没有的酶切位点包括:

AarI AbsI AccI AfeI AflII AgeI AjuI
AlfI AloI AscI AsiSI AvrII BarI BbvCI
BglII BlpI BmgBI BplI Bpu10I BsaBI BseRI
BsiWI BsmI BspDI BspEI BsrGI BstZ17I ClaI
CspCI DraIII Eco53kI FalI FseI FspAI HindIII
I-CeuI I-PpoI I-SceI KasI KflI MauBI MfeI
MreI NaeI NarI NdeI NgoMIV NruI NsiI
PacI PasI PI-PspI PI-SceI PluTI PmeI PmlI
PpuMI PshAI PsiI PsrI RsrII SacI SacII
SalI SbfI SexAI SfiI SfoI SgrAI SgrDI
SmaI SnaBI SpeI SphI SrfI StuI TspMI
XbaI XmaI

pTac-GST-WELQ中的单酶切位点包括:

AatII G,ACGT`C 1259 EcoNI CCTNN`N,NNAGG 268
Acc65I G`GTAC,C 963 EcoRI G`AATT,C 954
AhdI GACNN,N`NNGTC 2178 EcoRV GAT|ATC 4132
AleI CACNN|NNGTG 4843 HpaI GTT|AAC 4188
AlwNI CAG,NNN`CTG 2657 KpnI G,GTAC`C 967
ApaI G,GGCC`C 3893 MluI A`CGCG,T 3682
AvaI C`YCGR,G 968 MscI TGG|CCA 465
BamHI G`GATC,C 945 NcoI C`CATG,G 959
BanII G,RGCY`C 3893 Nhel G`CTAG,C 4318
BfuAI ACCTGC(N)4`(N)4, 62 NotI GC`GGCC,GC 974
BmeT110I CY`CG,RG 969 PaeR7I C`TCGA,G 968
BmtI G,CTAG`C 4322 PflFI GACN`N,NGTC 1153
BsaI GGTCTCN`(N)4, 2112 PflMI CCAN,NNN`NTGG 3264
BsaAI YAC|GTR 1160 PfoI T`CCNGG,A 1050
BsoBI C`YCGR,G 968 PspOMI G`GGCC,C 3889
BspMI ACCTGC(N)4`(N)4, 62 PspXI VC`TCGA,GB 968
BssHII G`CGCG,C 4093 PstI C,TGCA`G 940
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 3365 StyI C`CWWG,G 959
BstBI TT`CG,AA 655 SwaI ATTT|AAAT 685
BstEII G`GTNAC,C 3863 Tth111I GACN`N,NGTC 1153
Bsu36I CC`TNA,GG 4775 XhoI C`TCGA,G 968
EagI C`GGCC,G 974 ZraI GAC|GTC 1257

pTac-GST-WELQ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

Forward Primer (869-891): 5'-GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG-3'

Reverse Primer (1033-1055): 5'-CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG-3'

pTac-GST-WELQ的全序列信息:D5005 pTac-GST-WELQ序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D5005-1μg pTac-GST-WELQ 1μg
D5005-100μg pTac-GST-WELQ 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切及转化,在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
参考文献:
1.Dubin G, Stec-Niemczyk J, Kisielewska M, Pustelny K, Popowicz GM, et al. J Mol Biol. 2008. 379(2):343-56.
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