pTac-GST-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端含有GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)融合蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有WELQ Protease (P2311)酶切位点,可通过WELQ Protease切除N端的GST标签。
本质粒含有Tac启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。
本质粒在N端GST标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的GST标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。
通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
本质粒为氨苄青霉素抗性。
pTac-GST-WELQ质粒(4983bp)的图谱如下:
pTac-GST-WELQ质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
tac promoter | 183-211 |
lac operator | 219-235 |
GST tag coding sequence | 258-911 |
WELQ site | 930-941 |
Multiple cloning site (PstI-NotI) | 936-980 |
AmpR promoter | 1286-1390 |
Ampicillin resistance ORF | 1391-2251 |
pBR322 origin | 2422-3010 |
lacI promoter | 3254-3331 |
lacI coding sequence | 3332-4414 |
lac promoter | 4463-4493 |
lac operator | 4501-4517 |
M13 reverse primer (M13 rev) | 4525-4541 |
lacZα | 4537-81 |
M13 forward primer (M13 fwd) | 4557-4573 |
pTac-GST-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5005 pTac-GST-WELQ.pdf
pTac-GST-WELQ中没有的酶切位点包括:
AarI | AbsI | AccI | AfeI | AflII | AgeI | AjuI |
AlfI | AloI | AscI | AsiSI | AvrII | BarI | BbvCI |
BglII | BlpI | BmgBI | BplI | Bpu10I | BsaBI | BseRI |
BsiWI | BsmI | BspDI | BspEI | BsrGI | BstZ17I | ClaI |
CspCI | DraIII | Eco53kI | FalI | FseI | FspAI | HindIII |
I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KasI | KflI | MauBI | MfeI |
MreI | NaeI | NarI | NdeI | NgoMIV | NruI | NsiI |
PacI | PasI | PI-PspI | PI-SceI | PluTI | PmeI | PmlI |
PpuMI | PshAI | PsiI | PsrI | RsrII | SacI | SacII |
SalI | SbfI | SexAI | SfiI | SfoI | SgrAI | SgrDI |
SmaI | SnaBI | SpeI | SphI | SrfI | StuI | TspMI |
XbaI | XmaI |
pTac-GST-WELQ中的单酶切位点包括:
AatII | G,ACGT`C | 1259 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 268 |
Acc65I | G`GTAC,C | 963 | EcoRI | G`AATT,C | 954 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2178 | EcoRV | GAT|ATC | 4132 |
AleI | CACNN|NNGTG | 4843 | HpaI | GTT|AAC | 4188 |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2657 | KpnI | G,GTAC`C | 967 |
ApaI | G,GGCC`C | 3893 | MluI | A`CGCG,T | 3682 |
AvaI | C`YCGR,G | 968 | MscI | TGG|CCA | 465 |
BamHI | G`GATC,C | 945 | NcoI | C`CATG,G | 959 |
BanII | G,RGCY`C | 3893 | Nhel | G`CTAG,C | 4318 |
BfuAI | ACCTGC(N)4`(N)4, | 62 | NotI | GC`GGCC,GC | 974 |
BmeT110I | CY`CG,RG | 969 | PaeR7I | C`TCGA,G | 968 |
BmtI | G,CTAG`C | 4322 | PflFI | GACN`N,NGTC | 1153 |
BsaI | GGTCTCN`(N)4, | 2112 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 3264 |
BsaAI | YAC|GTR | 1160 | PfoI | T`CCNGG,A | 1050 |
BsoBI | C`YCGR,G | 968 | PspOMI | G`GGCC,C | 3889 |
BspMI | ACCTGC(N)4`(N)4, | 62 | PspXI | VC`TCGA,GB | 968 |
BssHII | G`CGCG,C | 4093 | PstI | C,TGCA`G | 940 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 3365 | StyI | C`CWWG,G | 959 |
BstBI | TT`CG,AA | 655 | SwaI | ATTT|AAAT | 685 |
BstEII | G`GTNAC,C | 3863 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 1153 |
Bsu36I | CC`TNA,GG | 4775 | XhoI | C`TCGA,G | 968 |
EagI | C`GGCC,G | 974 | ZraI | GAC|GTC | 1257 |
pTac-GST-WELQ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
Forward Primer (869-891): 5'-GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG-3'
Reverse Primer (1033-1055): 5'-CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG-3'
pTac-GST-WELQ的全序列信息:D5005 pTac-GST-WELQ序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D5005-1μg | pTac-GST-WELQ | 1μg |
D5005-100μg | pTac-GST-WELQ | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
AF0174 | GST Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
AG768 | GST抗体 | >20次 |
D2911-1μg | pET-N-GST-Thrombin-C-His | 1μg |
D2911-100μg | pET-N-GST-Thrombin-C-His | 100μg |
D2931-1μg | pET-Dual-N-GST | 1μg |
D2931-100μg | pET-Dual-N-GST | 100μg |
D2933-1μg | pET-Dual-N-GST-PreScission | 1μg |
D2933-100μg | pET-Dual-N-GST-PreScission | 100μg |
D5002-1μg | pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒) | 1μg |
D5002-100μg | pTac-His-MBP-WELQ (原核活性蛋白高表达质粒) | 100μg |
D5005-1μg | pTac-GST-WELQ | 1μg |
D5005-100μg | pTac-GST-WELQ | 100μg |
D5008-1μg | pT7-N-His-WELQ | 1μg |
D5008-100μg | pT7-N-His-WELQ | 100μg |
D5010-1μg | pT7-N-His-PSP-SUMO-WELQ | 1μg |
D5010-100μg | pT7-N-His-PSP-SUMO-WELQ | 100μg |
P2251 | BeyoGold™ GST-tag Purification Resin | 10ml |
P2253 | BeyoGold™ GST-tag Purification Resin | 100ml |
P2255 | BeyoGold™ GST-tag Purification Resin | 1000ml |
P2262 | GST标签蛋白纯化试剂盒 | 10ml |
P2311S | WELQ Protease | 500U |
P2311M | WELQ Protease | 2500U |
P2311L | WELQ Protease | 10kU |