pT7-N-His-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端含有His标签(His tag)融合蛋白的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有WELQ Protease (P2311)酶切位点,可通过WELQ Protease切除N端的His标签。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面,带有一个His标签的编码序列,含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。
本质粒在His标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。
通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
本质粒为卡那霉素抗性。
pT7-N-His-WELQ质粒(5301bp)的图谱如下:
pT7-N-His-WELQ质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
f1 origin | 12-467 |
Kanamycin resistance ORF | 560-1375 |
pBR322 origin | 1497-2085 |
lacI coding sequence | 3515-4597 |
lacI promoter | 4598-4675 |
T7 promoter | 4988-5006 |
lac operator | 5007-5031 |
His tag coding sequence | 5079-5096 |
WELQ site | 5109-5120 |
Multiple cloning site (PstI-XhoI) | 5115-5162 |
T7 Terminator | 5229-5276 |
pT7-N-His-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5008 pT7-N-His-WELQ.pdf
pT7-N-His-WELQ中没有的酶切位点包括:
AarI | AatII | AbsI | Acc65I | AflII | AgeI | AhdI |
AleI | AscI | AvrII | BaeI | BbvCI | BfuAI | BmgBI |
BmtI | BplI | BsaI | BseRI | BsiWI | BspMI | BsrGI |
BstBI | Bsu36I | CspCI | DraI | EagI | Eco53kI | FalI |
FseI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI | KpnI | MauBI |
MfeI | MreI | MscI | NcoI | NheI | NotI | PacI |
PasI | PI-PspI | PI-SceI | PmeI | PmlI | PspXI | PsrI |
RsrII | SacI | SacII | SbfI | ScaI | SexAI | SfiI |
SgrDI | SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | SwaI | ZraI |
pT7-N-His-WELQ中的单酶切位点包括:
AcuI | CTGAAG(N)14,NN` | 1599 | NmeAIII | GCCGAG(N)18-19,NN` | 4042 |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1732 | NruI | TCG|CGA | 1286 |
ApaI | G,GGCC`C | 4039 | PaeR7I | C`TCGA,G | 5157 |
AsiSI | GCG,AT`CGC | 945 | PciI | A`CATG,T | 2141 |
BamHI | G`GATC,C | 5121 | PflFI | GACN`N,NGTC | 2399 |
BclI | T`GATC,A | 4228 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3136 |
BglI | GCCN,NNN`NGGC | 3185 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3401 |
BglII | A`GATC,T | 5151 | PsiI | TTA|TAA | 370 |
BlpI | GC`TNA,GC | 5218 | PspOMI | G`GGCC,C | 4035 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 | PstI | C,TGCA`G | 5119 |
BssHII | G`CGCG,C | 3831 | PvuI | CG,AT`CG | 945 |
BssSaI | C`ACGA,G | 1968 | SalI | G`TCGA,C | 5145 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4566 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 |
BstEII | G`GTNAC,C | 4060 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 4923 |
BstZ17I | GTA|TAC | 2374 | SmaI | CCC|GGG | 1069 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 245 | SphI | G,CATG`C | 4775 |
EcoRI | G`AATT,C | 5133 | StyI | C`CWWG,G | 5240 |
EcoRV | GAT|ATC | 5141 | TatI | W`GTAC,W | 2337 |
FspI | TGC|GCA | 3164 | TspMI | C`CCGG,G | 1067 |
FspAI | RTGC|GCAY | 3164 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 2399 |
HindIII | A`AGCT,T | 5127 | XbaI | T`CTAG,A | 5034 |
HpaI | GTT|AAC | 3740 | XhoI | C`TCGA,G | 5157 |
MluI | A`CGCG,T | 4242 | XmaI | C`CCGG,G | 1067 |
NdeI | CA`TA,TG | 5074 |
pT7-N-His-WELQ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
Forward primer (4988-5004): 5'-TAATACGACTCACTATA-3'
Reverse primer (5215-5234): 5'-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
pT7-N-His-WELQ的全序列信息:D5008 pT7-N-His-WELQ序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D5008-1μg | pT7-N-His-WELQ | 1μg |
D5008-100μg | pT7-N-His-WELQ | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。