pT7-N-His-WELQ
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产品编号 D5008-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pT7-N-His-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端含有His标签(His tag)融合蛋白的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有WELQ Protease (P2311)酶切位点,可通过WELQ Protease切除N端的His标签。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面,带有一个His标签的编码序列,含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。

本质粒在His标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。

通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。

本质粒为卡那霉素抗性。

pT7-N-His-WELQ质粒(5301bp)的图谱如下:

pT7-N-His-WELQ质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 560-1375
pBR322 origin 1497-2085
lacI coding sequence 3515-4597
lacI promoter 4598-4675
T7 promoter 4988-5006
lac operator 5007-5031
His tag coding sequence 5079-5096
WELQ site 5109-5120
Multiple cloning site (PstI-XhoI) 5115-5162
T7 Terminator 5229-5276

pT7-N-His-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5008 pT7-N-His-WELQ.pdf

pT7-N-His-WELQ中没有的酶切位点包括:

AarI AatII AbsI Acc65I AflII AgeI AhdI
AleI AscI AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI
BmtI BplI BsaI BseRI BsiWI BspMI BsrGI
BstBI Bsu36I CspCI DraI EagI Eco53kI FalI
FseI I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI KpnI MauBI
MfeI MreI MscI NcoI NheI NotI PacI
PasI PI-PspI PI-SceI PmeI PmlI PspXI PsrI
RsrII SacI SacII SbfI ScaI SexAI SfiI
SgrDI SnaBI SpeI SrfI StuI SwaI ZraI

pT7-N-His-WELQ中的单酶切位点包括:

AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1599 NmeAIII GCCGAG(N)18-19,NN` 4042
AlwNI CAG,NNN`CTG 1732 NruI TCG|CGA 1286
ApaI G,GGCC`C 4039 PaeR7I C`TCGA,G 5157
AsiSI GCG,AT`CGC 945 PciI A`CATG,T 2141
BamHI G`GATC,C 5121 PflFI GACN`N,NGTC 2399
BclI T`GATC,A 4228 PpuMI RG`GWC,CY 3136
BglI GCCN,NNN`NGGC 3185 PshAI GACNN|NNGTC 3401
BglII A`GATC,T 5151 PsiI TTA|TAA 370
BlpI GC`TNA,GC 5218 PspOMI G`GGCC,C 4035
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2258 PstI C,TGCA`G 5119
BssHII G`CGCG,C 3831 PvuI CG,AT`CG 945
BssSaI C`ACGA,G 1968 SalI G`TCGA,C 5145
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4566 SapI GCTCTTCN`NNN, 2258
BstEII G`GTNAC,C 4060 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
BstZ17I GTA|TAC 2374 SmaI CCC|GGG 1069
DraIII CAC,NNN`GTG 245 SphI G,CATG`C 4775
EcoRI G`AATT,C 5133 StyI C`CWWG,G 5240
EcoRV GAT|ATC 5141 TatI W`GTAC,W 2337
FspI TGC|GCA 3164 TspMI C`CCGG,G 1067
FspAI RTGC|GCAY 3164 Tth111I GACN`N,NGTC 2399
HindIII A`AGCT,T 5127 XbaI T`CTAG,A 5034
HpaI GTT|AAC 3740 XhoI C`TCGA,G 5157
MluI A`CGCG,T 4242 XmaI C`CCGG,G 1067
NdeI CA`TA,TG 5074

pT7-N-His-WELQ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

Forward primer (4988-5004): 5'-TAATACGACTCACTATA-3'

Reverse primer (5215-5234): 5'-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'

pT7-N-His-WELQ的全序列信息:D5008 pT7-N-His-WELQ序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D5008-1μg pT7-N-His-WELQ 1μg
D5008-100μg pT7-N-His-WELQ 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切及转化,在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
参考文献:
1.Dubin G, Stec-Niemczyk J, Kisielewska M, Pustelny K, Popowicz GM, et al. J Mol Biol. 2008. 379(2):343-56.
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