碧云天的BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠),也称Concanavalin A磁珠、ConA磁珠、刀豆凝集素A磁珠、刀豆凝集素磁珠、伴刀豆球蛋白A磁珠或伴刀豆球蛋白磁珠,由高质量的刀豆素A (Concanavalin A, ConA)与超顺磁性纳米级磁珠共价偶联而成,能够快速、高效、灵敏、特异性地与糖蛋白、糖脂、多糖等带有糖基化修饰分子结合,主要用于分离细胞或用于分离细胞或组织裂解液或血清中的糖蛋白等糖基化修饰分子等实验,特别可以用于染色质的核酸酶靶向切割和释放(CUT&RUN)。
Concanavalin A,简称ConA或Con A,中文名为刀豆素A,又叫伴刀豆球蛋白A、刀豆蛋白A或刀豆凝集素A,是一种从Jack beans (Canavalia ensiformis)分离的甘露糖/葡萄糖结合凝集素(Lectin),是使用最广泛的凝集素之一,CAS号为11028-71-0,其单体的分子量约为25.5kDa,可结合一个Ca2+和一个Mn2+,含一个糖基结合部位,对末端α-D-甘露糖基和α-D-葡糖基残基具有高亲和力。刀豆素A是一种T细胞有丝分裂原,可以激活免疫系统,募集淋巴细胞并诱导细胞因子的产生。除了促有丝分裂活性外,刀豆素A还可以通过特定分子机制诱导程序性细胞死亡。据报道刀豆素A还可以激活NFAT(Nuclear factor of activated T cells),而NFAT是转录因子家族,在免疫系统的发育和发挥免疫功能中起重要作用。当pH在5.8-7.0之间时,刀豆素A以四聚体形式存在,在pH6.5或更低的条件下解离为二聚体,pH高于7.0时可形成更大的聚合体 [1]。
ConA磁珠在免疫学、生物化学及医学等领域内应用广泛,如分离细胞,分离细胞或组织裂解液或血清中的糖蛋白等糖基化分子,包括在用于染色质分析的新技术CUT&RUN (Cleavage Under Targets & Release Using Nuclease)等中,ConA磁珠起到了非常关键的作用。使用ConA磁珠分离或固定细胞非常便捷,并在后续清洗过程中最大程度减少细胞丢失,同时ConA磁珠也可以用于收集和固定细胞核[2-4]。ConA磁珠用于纯化糖蛋白的实验流程参考图1,分离或固定细胞或细胞核等的流程相似。
图1.碧云天BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠)用于纯化糖蛋白的实验流程图。
本产品结合特异性强。本产品对糖类具有高度专一的识别能力,可以特异性结合糖类,可分离细胞、细胞核或糖蛋白等含有适当糖基化修饰的分子,可以直接用于CUT&RUN等实验,获得的糖基化蛋白可以用于Western、质谱等的分析检测。
本产品结合量高。与同类产品相比,本产品对糖类蛋白的结合量高,而且磁珠粒径小,不易产生非特异吸附。本产品每毫升磁珠悬浊液含有≥1mg ConA,每个ConA蛋白具有4个糖基结合部位,每毫升磁珠悬浊液可结合≥1mg糖蛋白,可高效地进行细胞或糖蛋白等的分离纯化等实验。
本产品结合糖蛋白速度快,吸附时间短,可以高效结合糖基。本产品所使用的纳米级磁珠(~200nm)具有超大比表面积,有效缩短了ConA与糖类结合所需的时间。缩短操作时间可以避免在长时间操作过程中糖蛋白的降解,有效保证了糖蛋白的活性及完整性。使用本磁珠和国外同类产品Competitor C公司磁珠分离细胞的效果参考图2。
图2.碧云天BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠)分离细胞的效果图。使用本产品(BeyoMag™ ConA Magnetic Beads)与国外C公司同类产品(Competitor C)分别用于分离L929 (小鼠上皮成纤维细胞)和NRK (大鼠肾细胞) (C7827),然后培养2小时后拍照。实际结果会因实验条件、细胞类型、细胞状态等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本产品使用便捷。本产品储存在特殊保护液中,不含甘油,磁性分离,无需离心。本产品不仅适用于少量样本的检测,也适用于高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统,不同操作方法之间一致性高。
本产品的主要指标如下表:
Characteristics | Description |
Product content | 10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer |
Beads size | ~200nm |
Magnetization | Superparamagnetic |
Coupled protein | Concanavalin A |
M.W. of protein | ~102kDa (tetramer) |
Protein concentration | ≥1mg Concanavalin A per ml beads |
Binding capacity | ≥1mg glycan/glycoproteins per ml beads |
Specificity | Glycan and glycoconjugates |
Application | Isolating cells or glycoproteins, CUT&RUN |
如果每个样品使用10μl磁珠,每毫升本产品可以用于100个样品。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2156-200μl | BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠) | 200μl |
P2156-1ml | BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠) | 1ml |
P2156-5ml | BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠) | 5ml |
- | 说明书 | 1份 |
4℃保存,两年有效。
注意事项:本产品需维持pH为6-8,避免高速离心、干燥或冻存;请勿长时间将磁珠置于磁场中,否则可能会引起磁珠聚团。
本产品使用前要适当充分重悬,即颠倒若干次使磁珠混合均匀,混匀操作须轻柔,不宜剧烈涡旋震荡等,避免ConA变性等。
在用于沉淀或纯化时,建议设置适当的阳性和阴性对照组。
待结合分子的类型、大小等都会影响结合效率,建议通过稀释法来确定每种具体应用的磁珠用量,同时可以考虑加大磁珠用量至待结合分子2-3倍摩尔数量以确保结合充分。
ConA需要Ca2+和Mn2+离子存在才能有活性,所以实验过程中应避免使用含有EDTA或其它金属离子螯合剂的试剂。
糖蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作,并应始终放置在4℃或冰浴,以减缓糖蛋白降解。为有效抑制蛋白降解,可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物,例如碧云天的P1005/P1006 蛋白酶抑制剂混合物(通用型)、P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1010/P1011 蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)、P1050/P1051 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等,但各个蛋白酶抑制剂混合物中的EDTA不能添加。
如果使用真空泵等仪器吸取上清液,须注意真空泵的吸液强度,以免吸力过大而吸取到磁珠。
与细胞孵育时ConA磁珠可能会发生聚集,属于正常现象,不影响磁珠的正常使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Buffer | Components |
Binding Buffer | 20mM Hepes (pH7.4), 150mM NaCl (optional), 1mM MgCl2, 1mM MnCl2, 1mM CaCl2 |
Wash Buffer | 20mM Hepes (pH7.4), 150mM NaCl (optional), 1mM MgCl2, 1mM MnCl2, 1mM CaCl2, 0.1% Tween-20 |
Elution Buffer | 5mM Tris (pH8.0), 150mM NaCl, 1M Glucose |