BeyoMag™ Streptavidin Magnetic Beads (链霉亲和素磁珠)
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产品编号 P2151-1ml
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¥ 785.00
产品包装:
200μl 1ml 5ml
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碧云天的BeyoMag™ Streptavidin Magnetic Beads (链霉亲和素磁珠),也称Streptavidin磁珠或SA磁珠,由高质量的链霉亲和素 (Streptavidin, SA)与超顺磁性纳米级磁珠共价偶联而成,能够快速、高效、灵敏、特异性地与生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化生物素标记的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等,用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

Streptavidin的分子量为55kD,可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为 Kd=10-15M。Streptavidin是一个4聚体蛋白,可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素,从Streptomyces adidiniil中纯化获得,和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是,Streptavidin是一种非糖基化蛋白,并且基本不带电荷。Avidin的pI=~10.5,在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷,因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多,这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。

链霉亲和素磁珠在生物医药领域内应用非常广泛,可以特异性地结合生物素标记的抗原或者抗体,作为免疫沉淀、细胞分选、ELISA等反应的载体;结合生物素标记的DNA或RNA片段,从细胞或组织提取物中分离特定的核酸-蛋白质复合物,用于蛋白质与核酸相互作用研究;结合生物素标记核酸探针,用于DNA、RNA杂交实验或mRNA的分离和纯化等;还可用于纯化单链生物素标记DNA寡核苷酸、分离生物素标记PCR产物等。本产品的实验流程参考图1。

图1.碧云天BeyoMag™ Streptavidin Magnetic Beads (链霉亲和素磁珠)的实验流程图。

本产品结合量容量高。与同类的很多产品相比,本产品具有非常高的结合容量,对复杂样品中生物素标记的分子可以快速进行分离纯化,而且磁珠粒径小,不易产生非特异吸附。本产品每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠,含有≥0.6mg高质量链霉亲和素蛋白,每毫克磁珠可结合≥20μg生物素化标记兔IgG,可高效地进行免疫沉淀等实验。

本产品特异性强。本产品可特异性地结合生物素化的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等配体分子,获得的产物纯度高,可进一步用于Western、ELISA、Northern、qPCR、质谱分析等一系列后续的分析测试。

本产品结合生物标记分子速度快,吸附时间短,可快速高效结合配体。本产品所使用的纳米级磁珠(~200nm)具有超大比表面积,有效缩短了链霉亲和素与生物素结合所需的时间。缩短操作时间可以避免在长时间操作过程中配体分子的降解,有效保持配体分子的活性及完整性。

本产品使用便捷。本产品储存在特殊保护液中,不含甘油,磁性分离,无需离心。本产品不仅适用于少量样本的检测,也适用于高通量筛选(high-throughput screening)的自动化操作系统,不同操作方法之间一致性高。

本产品的主要指标如下表:

Characteristics Description
Product content 10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer
Beads size ~200nm
Magnetization Superparamagnetic
Coupled protein Streptavidin
M.W. of protein ~55kDa (Streptavidin)
Protein concentration ≥ 0.6mg streptavidin per ml beads
Binding capacity per mg beads: ≥20μg biotinylated antibody or dsDNA, ≥1000pmol free Biotin, ≥400pmol biotinylated oligonucleotides or peptides
Specificity Biotinylated ligands
Elution method Elution with acid or SDS‐PAGE loading buffer for single-use applications
Application purification of biotin-labeled proteins and nucleic acids, IP, Co-IP, DNA-protein pulldowns

如果每个用品使用20μl磁珠,每毫升本产品可以用于50个样品

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P2151-200μl BeyoMag™ Streptavidin Magnetic Beads 200μl
P2151-1ml BeyoMag™ Streptavidin Magnetic Beads 1ml
P2151-5ml BeyoMag™ Streptavidin Magnetic Beads 5ml
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,两年有效。长期不使用,可以-20℃保存,-20℃可以保存更长时间。

注意事项:

本产品需维持pH为6-8,避免高速离心、干燥;请勿长时间将磁珠置于磁场中,否则可能会引起磁珠聚团。

本产品使用前要适当充分重悬,即颠倒若干次使磁珠混合均匀,混匀操作须轻柔,不宜剧烈涡旋震荡等,避免蛋白变性等。

在免疫沉淀或纯化时,建议设计阳性和阴性对照组。

待结合分子的类型、大小及生物素标记方式和程度等都会影响结合效率,建议通过稀释法来确定每种具体应用的磁珠用量,同时可以考虑加大磁珠用量至待结合分子2-3倍摩尔数量以确保结合充分。

游离生物素会降低本磁珠的结合能力,因此在生物素标记蛋白或核酸后,需要用脱盐柱等方法去除多余的游离生物素。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作,并应始终放置在4℃或冰浴,以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解,可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物,例如碧云天的P1005/P1006蛋白酶抑制剂混合物(通用型)P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)P1010/P1011 蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)P1050/P1051 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等。

如果使用真空泵等仪器吸取上清液,须注意真空泵的吸液强度,以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集,属于正常现象,不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集,并且不会影响磁珠的抗体结合效率。

酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的磁珠不可重复使用。为了尽量减少链霉亲和素的脱落,无论是手动操作还是自动操作,低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。

高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响,但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异,以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.缓冲液的准备。参考下表,根据具体的实验用途配制相应的缓冲液。
Buffer Components Application
TBS Tris Buffered Saline (e.g. ST661/ST665) Prewash
Binding & Washing Buffer I (2X) 10mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM EDTA, 2M NaCl, 0.01%-0.1% Tween-20 for nucleic acid
Washing Buffer II (1X) PBS (pH7.4), 0.05% Tween-20, with or without 0.01%-0.1% BSA for antibody/protein
DNA/RNA Elution Buffer 95% formamide, 10mM EDTA, pH 8.2 for nucleic acid
Acid Elution Buffer 0.1M Glycine (pH2.0) for antibody/protein
SDS-PAGE Loading Buffer SDS-PAGE Loading Buffer (e.g. P0015) for antibody/protein
注1:可根据所结合分子的类型或实验需要,适当调整缓冲液的盐浓度及pH。
注2:Binding & Washing Buffer I (2X)用于洗涤时须用等体积超纯水稀释至1X。
2.链霉亲和素磁珠准备。
a.取磁珠并去除上清。用移液器轻轻吹打以充分重悬链霉亲和素磁珠,取20-100μl置于1.5ml离心管(FTUB015)中待用。使用前置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离1分钟,去除上清。
b.洗涤磁珠。加入1X TBS(ST661/ST665)至最终体积为约0.5ml,用移液器轻轻吹打重悬链霉亲和素磁珠。置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离10秒,去除上清,完成一次洗涤步骤。然后再按照前述洗涤步骤,洗涤2次。最终去除上清,并根据后续的实验目的,用适量的适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬链霉亲和素磁珠。
c.本磁珠及溶液并非RNase-free处理,如果用于RNA相关的应用,在上述洗涤后,用0.5ml DEPC处理过的0.05M NaCl洗涤磁珠2次,每次2分钟;然后再用0.5ml DEPC处理过的0.1M NaCl洗涤一次。根据后续的实验目的,按照初始体积的量,用适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬链霉亲和素磁珠。
注1:通常,每个样品的磁珠用量约为20-100μl。具体可根据生物素标记分子的多少,参考产品主要指标表中磁珠的“Binding capacity”,计算生物素标记分子的加入量。根据不同的实验目的,可以考虑生物素标记分子的加入量为磁珠载量的1-2倍,使磁珠饱和,即把磁珠充分利用,此时通常实验目的是分离纯化;或者加入磁珠的载量是待分离纯化的生物素标记分子的2-3倍,以确保生物素标记分子能被充分分离纯化,此时通常实验目的是为了对样品中的生物素标记分子进行定量分析。
注2:多个样品时,可以取总磁珠量合并洗涤处理后再平分到各个样品管中,洗涤液用量须相应增加。
注3:须避免待用时间过长,导致磁珠干燥。
3.生物素标记核酸的结合和洗脱。
a.磁珠重悬。接步骤2b或2c,用2倍原始磁珠体积的Binding & Washing Buffer I (2X)重悬磁珠。
b.核酸吸附。加入等体积的用超纯水配制的生物素标记核酸样品(加入样品后体积为原始磁珠体积的4倍),充分振荡混悬,置于旋转混合仪上,室温孵育10-30分钟或4℃孵育2小时。注:可通过测定反应前后核酸的浓度,计算结合到磁珠上的核酸量。
c.磁性分离。将离心管置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离1分钟,去除上清。
d.洗涤。取1ml Binding & Washing Buffer I (1X)加入分离得到的磁珠中,充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离1分钟,去除上清。再重复洗涤1-2次。
e.洗脱。加入100μl或适量的DNA/RNA Elution Buffer,65℃孵育5min或90℃孵育2min。
4.生物素标记抗体或蛋白的结合和洗脱。
a.抗体或蛋白吸附。加入适量用Washing Buffer II (1X)稀释的生物素标记抗体、蛋白、抗原抗体复合物或蛋白复合物,充分振荡重悬磁珠,置于旋转混合仪上,室温孵育30-60分钟或4℃孵育4-16小时。
b.磁性分离。将离心管置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离1分钟,去除上清。
c.洗涤。取1ml的Washing Buffer II (1X)加入分离得到的磁珠中,充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离1分钟,去除上清。重复洗涤3-4次。
d.洗脱。根据目的核酸或蛋白的特点及后续实验要求,可以选择如下方法之一或其它合适方法进行洗脱。
(a)酸性洗脱缓冲液洗脱。每个样品加入100μl或适量Acid Elution Buffer,混匀后置于旋转混合仪上,室温孵育5分钟。然后置于磁力架上分离1分钟,将上清转移到新的离心管中。洗脱液置于4℃待用,或者-20℃长期保存。
注1:如果选择酸性洗脱缓冲液进行洗脱,就有可能发生链霉亲和素脱落,需注意孵育时间不要超过10分钟。
注2:酸性洗脱缓冲液能破坏绝大部分的抗体与抗原的相互作用。但为了确保更好的洗脱效果,可预先用300µl 0.1% Tween-20的水溶液洗涤磁珠1次。
(b)SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS洗脱。每个样品加入100μl或适量的1X SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS,95℃加热3分钟。置于磁力架上分离1分钟,取上清用于SDS-PAGE电泳或Western检测等。
注:如果选择SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS进行洗脱,那么洗脱液将包含链霉亲和素单体和二聚体、生物素标记抗体或蛋白。
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