碧云天生产的BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase，中文名为BeyoNGS™ pA-Tn5转座酶，是一种来源于E.coli，经过改造的具有极高活性Tn5转座酶突变体和Protein A的融合蛋白。pA-Tn5转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5转座体)，可用于CUT&Tag实验。

CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation)，即靶向剪切及标记，是一种新兴的蛋白质与DNA相互作用的研究方法，具有特异性强、背景噪音较低、灵敏度高、重复性较好、成本低等优点，被用来替代传统的ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation-sequencing)方法。CUT&Tag技术的核心是利用pA/G-Tn5 Transposome上的Protein A或Protein G具有与靶蛋白上结合的抗体特异性结合的能力，使Tn5转座体能通过Protein A/G及抗体与靶蛋白形成复合物，随后加入Mg²⁺激活Tn5转座体的酶活性对靶蛋白结合的DNA进行切割实现靶向的DNA片段化(DNA Fragmentation)，同时将其携带的测序接头连接到片段两端从而实现标记，后续通过PCR反应进行缺口填补，并借助双端标记PCR引物(Dual-indexed PCR primers)扩增后，制备成适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)平台的DNA文库 [1]。

BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组蛋白，与野生型Tn5转座酶相比，其插入效率至少提升1000倍，具有转座随机性好、稳定性高、插入位点易测序等特点。

酶储存溶液：50mM HEPES (pH7.2), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D7110S	BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase (40μM)	20μl
D7110M	BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase (40μM)	100μl
－	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

注意事项：

本产品含50%甘油，-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，否则会冻结， 反复冻融可能会降低本产品的酶活性。

本产品较为粘稠，吸取时注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
构建CUT&Tag实验所需的BeyoNGS™ pA-Tn5转座体。
1.ME和接头(Adapters)的序列。
ME: 5'-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3'
Primer 1: 5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'
Primer 2: 5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3'
注：本接头序列参考Nextera® DNA Sample Preparation Kit (Illumina, FC-121-1030)，也可按照不同高通量测序的要求进行设计。
2.制备Adapter 1和Adapter 2。
按照下表分别配制Adapter 1和Adapter 2退火反应体系。退火反应后Adapter 1或Adapter 2的终浓度为200μM。

Component	Volume
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)	10μl
ME (500μM)	20μl
Primer-1 or 2 (500μM)	20μl
Total Reaction Volume	50μl

使用PCR仪按下表设置退火反应程序，反应结束即可获得Adapter 1和Adapter 2。

Step	Temperature
1	95℃, 2min
2	95℃, 8s, -0.1℃ per cycle
3	GOTO step 2700 cycles
4	4℃ forever

3.BeyoNGS™ pA-Tn5转座体的制备。
按照下表，将BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase、Adapter 1和Adapter 2按摩尔比1:0.5:0.5混合，吹打混匀，室温孵育1小时。

Component	Volume
BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase (40μM)	10μl
Adaptor 1 (200μM)	1μl
Adaptor 2 (200μM)	1μl

注：可根据实验需要适当提高BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase的混合比例，但Adapter 1和Adapter 2的浓度需要保持一致。制备好Tn5转座体可直接用于CUT&Tag实验，也可以-20℃保存。
参考文献：
1. Hatice S. Nat Commun. 2019.10: 1930.
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产品编号	产品名称	包装
D0251	Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)	1ml
D7102S	BeyoNGS™ Tn5 Transposase	800pmol
D7102M	BeyoNGS™ Tn5 Transposase	4000pmol
D7103S	BeyoNGS™ DNA Library Quick-Prep Kit (For Illumina)	20次
D7103M	BeyoNGS™ DNA Library Quick-Prep Kit (For Illumina)	100次
P2156-200μl	BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠)	200μl
P2156-1ml	BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠)	1ml
P2156-5ml	BeyoMag™ Concanavalin A Magnetic Beads (刀豆素A磁珠)	5ml
D7110S	BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase	800pmol
D7110M	BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase	4000pmol
D7112S	BeyoNGS™ pG-Tn5 Transposase	800pmol
D7112M	BeyoNGS™ pG-Tn5 Transposase	4000pmol