BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase
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产品编号 D7110S
数量
¥ 1398.00
产品包装:
800pmol 4000pmol
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碧云天生产的BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase,中文名为BeyoNGS™ pA-Tn5转座酶,是一种来源于E.coli,经过改造的具有极高活性Tn5转座酶突变体和Protein A的融合蛋白。pA-Tn5转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5转座体),可用于CUT&Tag实验。

CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation),即靶向剪切及标记,是一种新兴的蛋白质与DNA相互作用的研究方法,具有特异性强、背景噪音较低、灵敏度高、重复性较好、成本低等优点,被用来替代传统的ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation-sequencing)方法。CUT&Tag技术的核心是利用pA/G-Tn5 Transposome上的Protein A或Protein G具有与靶蛋白上结合的抗体特异性结合的能力,使Tn5转座体能通过Protein A/G及抗体与靶蛋白形成复合物,随后加入Mg2+激活Tn5转座体的酶活性对靶蛋白结合的DNA进行切割实现靶向的DNA片段化(DNA Fragmentation),同时将其携带的测序接头连接到片段两端从而实现标记,后续通过PCR反应进行缺口填补,并借助双端标记PCR引物(Dual-indexed PCR primers)扩增后,制备成适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)平台的DNA文库 [1]。

BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组蛋白,与野生型Tn5转座酶相比,其插入效率至少提升1000倍,具有转座随机性好、稳定性高、插入位点易测序等特点。

酶储存溶液:50mM HEPES (pH7.2), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7110S BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase (40μM) 20μl
D7110M BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase (40μM) 100μl
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。

注意事项:

本产品含50%甘油,-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存,否则会冻结, 反复冻融可能会降低本产品的酶活性。

本产品较为粘稠,吸取时注意取样量准确,加样后请注意充分吹打混匀,避免产生气泡。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
构建CUT&Tag实验所需的BeyoNGS™ pA-Tn5转座体。
1.ME和接头(Adapters)的序列。
ME: 5'-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3'
Primer 1: 5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'
Primer 2: 5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3'
注:本接头序列参考Nextera® DNA Sample Preparation Kit (Illumina, FC-121-1030),也可按照不同高通量测序的要求进行设计。
2.制备Adapter 1和Adapter 2。
按照下表分别配制Adapter 1和Adapter 2退火反应体系。退火反应后Adapter 1或Adapter 2的终浓度为200μM。
Component Volume
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251) 10μl
ME (500μM) 20μl
Primer-1 or 2 (500μM) 20μl
Total Reaction Volume 50μl
使用PCR仪按下表设置退火反应程序,反应结束即可获得Adapter 1和Adapter 2。
Step Temperature
1 95℃, 2min
2 95℃, 8s, -0.1℃ per cycle
3 GOTO step 2700 cycles
4 4℃ forever
3.BeyoNGS™ pA-Tn5转座体的制备。
按照下表,将BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase、Adapter 1和Adapter 2按摩尔比1:0.5:0.5混合,吹打混匀,室温孵育1小时。
Component Volume
BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase (40μM) 10μl
Adaptor 1 (200μM) 1μl
Adaptor 2 (200μM) 1μl
注:可根据实验需要适当提高BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase的混合比例,但Adapter 1和Adapter 2的浓度需要保持一致。制备好Tn5转座体可直接用于CUT&Tag实验,也可以-20℃保存。
参考文献:
1. Hatice S. Nat Commun. 2019.10: 1930.
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