pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒)
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产品编号 D3005-1μg
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¥ 888.00
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1μg 100μg
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pET-His-MCS-Avi是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达可被生物素标记的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒在多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)位于His标签(His tag)和Avi标签(Avi tag)之间,目的蛋白表达后在ATP、生物素(Biotin)以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA存在的体外条件下,BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上,从而对目的蛋白进行生物素标记。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。

Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签,在ATP和生物素存在的条件下,BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素,从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小,只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记,生物素标记效率高,可重复性好;体内或体外均可进行标记,标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高,从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等;相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记,BirA催化的反应条件更温和,对被标记蛋白活力影响小,酶活效率高,标记特异性强[1]。

本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。

pET-His-MCS-Avi质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Ampicillin Position
ori 1240-1828
lacI 3761-4843
T7 promoter 5230-5248
His tag 5323-5352
Multiple Cloning Sites 5378-5414
Avi tag 5428-5472
T7 Terminator 5540-5587

pET-His-MCS-Avi质粒(5799bp)的图谱如下:

pET-His-MCS-Avi表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3005 pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒).pdf

pET-His-MCS-Avi中没有的酶切位点包括:

AanI AarI AatI AbsI AcvI AdeI AflII
AhlI AjiI AjuI AleI AloI AscI AsiSI
AspA2I AsuII AsuNHI AvrII AxyI BaeI BbrPI
BbvCI BcuI BfrI BlnI BmgBI BmtI BplI
Bpu14I Bse21I BseRI BsiWI Bsp119I Bsp1407I BspOI
BspTI BspT104I BsrGI Bst98I BstAFI BstAUI BstBI
BstSNI Bsu36I BtrI Cfr9I CpoI CsiI CspI
Csp45I CspCI DraIII Ecl136II Eco53kI Eco72I Eco81I
Eco105I Eco147I EcoICRI EcoT22I FalI FseI I-CeuI
I-PpoI I-SceI KflI MabI MauBI MfeI Mph1103I
MreI MspCI MssI MunI Nb.BbvCI NheI NsiI
NspV Nt.BbvCI OliI PacI PalAI PasI PceI
Pfl23II PI-PspI PI-SceI PmaCI PmeI PmlI PsiI
Psp124BI PspCI PspLI PsrI RgaI RigI RsrII
Rsr2I SacI SalI SanDI SbfI SdaI SexAI
SfaAI SfiI SfuI SgfI SgrDI SgsI SmaI
SmiI SnaBI SpeI SrfI Sse8387I SseBI SspBI
SstI StuI SwaI TspMI Vha464I XmaI XmaCI
XmaJI Zsp2I

pET-N-His-Avi中的单酶切位点包括:

AatII G,ACGT`C 77 KpnI G,GTAC`C 5398
Acc65I G`GTAC,C 2116 MluI A`CGCG,T 4488
AccI GT`MK,AC 5394 MscI TGG|CCA 2917
AgeI A`CCGG,T 5409 NcoI C`CATG,G 5315
AhdI GACNN,N`NNGTC 996 NdeI CA`TA,TG 5378
AlwNI CAG,NNN`CTG 1475 NotI GC`GGCC,GC 5401
ApaI G,GGCC`C 4285 NruI TCG|CGA 3389
BclI T`GATC,A 4474 PaeR7I C`TCGA,G 5383
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 3305 PciI A`CATG,T 1884
BglII A`GATC,T 5210 PflFI GACN`N,NGTC 2142
BlpI GC`TNA,GC 5529 PshAI GACNN|NNGTC 3647
Bpu10I CC`TNA,GC 2779 PspOMI G`GGCC,C 4281
BsaAI YAC|GTR 930 PspXI VC`TCGA,GB 5383
BsaI GGTCTC 7/11 2136 PstI C,TGCA`G 754
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 3305 PvuI CG,AT`CG 627
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2001 SacII CC,GC`GG 5401
BssHII G`CGCG,C 4077 SapI GCTCTTCN`NNN, 2001
BstEII G`GTNAC,C 4306 ScaI AGT|ACT 515
BstZ17I GTA|TAC 2117 SgrAI CR`CCGG,YG 5169
ClaI AT`CG,AT 5773 SphI G,CATG`C 5021
EcoNI CCTNN`N,NNAGG 4956 SspI AAT|ATT 191
EcoRI G`AATT,C 5797 Tth111I GACN`N,NGTC 2142
FspAI TGC|GCA 2907 XbaI T`CTAG,A 5276
HindIII A`AGCT,T 5766 XhoI C`TCGA,G 5383
HpaI GTT|AAC 3986 ZraI GAC|GTC 75

pET-His-MCS-Avi质粒中推荐使用的测序引物序列如下: T7-R (5230-5248): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'

pET-His-MCS-Avi的全序列信息:D3005 pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒)全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D3005-1µg pET-His-MCS-Avi 1µg
D3005-100µg pET-His-MCS-Avi 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转化。
3.本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
参考文献:
1.Millard G.Cull, Peter J.Schatz. Methods in Enzymology. 2000. Volume 326:430-440.
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