pET-N-Avi-His-SUMO3是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达可被生物素标记的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒由T7启动子驱动N端带有Avi标签(Avi tag)、His标签(His tag)以及SUMO3标签(SUMO3 tag)的目的蛋白。在ATP、生物素(Biotin)以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA存在的体外条件下，BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而对目的蛋白进行生物素标记。同时，本质粒带有SUMO3标签，可被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现相应标签蛋白与目的蛋白的高效分离。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是广泛存在于真核生物的蛋白家族。和泛素化(Ubiquitination)类似，类泛素蛋白修饰分子通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞核到细胞膜的运输、转录调控、细胞凋亡、蛋白质的稳定、压力应激和细胞周期的调控等[2]。
SUMO3标签源自人SUMO3基因，在大肠杆菌体系中SUMO3标签可以作为分子伴侣帮助目的蛋白在表达过程中正确折叠，提高目的蛋白的可溶性和表达量。SUMO3标签在体外可以被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现SUMO3标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留，因此SUMO3标签适用于大肠杆菌重组蛋白的表达和纯化[3]。
本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。
pET-N-Avi-His-SUMO3质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7 promoter | 21-39 |
| Avi tag | 120-164 |
| His tag | 180-197 |
| SUMO3 tag | 204-479 |
| Multiple Cloning Sites | 477-502 |
| His tag | 523-540 |
| T7 Terminator | 607-654 |
| f1 origin | 691-1146 |
| Ampicillin | 1277-2137 |
| ori | 2308-2896 |
| lacI | 4326-5408 |
pET-N-Avi-His-SUMO3质粒(5774bp)的图谱如下：
pET-N-Avi-His-SUMO3表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3007 pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒).pdf。
pET-N-Avi-His-SUMO3中没有的酶切位点包括：
| AarI | AatII | AbsI | Acc36I | AcvI | AflII | AgeI |
| AhlI | AjuI | AjuI | AscI | AsiGI | AsiSI | AspA2I |
| AsuII | AsuNHI | AvrII | AxyI | BaeI | BalI | BanIII |
| BbrPI | BbvCI | BcuI | BfrI | BfuAI | BlnI | BmtI |
| BplI | Bpu14I | BsaI | Bsa29I | BsaMI | Bse21I | BseCI |
| BshVI | BshTI | BsiWI | BsmI | Bso31I | Bsp68I | Bsp119I |
| Bsp1407I | BspDI | BspMI | BspOI | BspTI | BspT104I | BspTNI |
| BspXI | BsrGI | Bst98I | BstAFI | BstAUI | BstBI | BstSNI |
| Bsu15I | Bsu36I | BsuTUI | BtuMI | BveI | Cfr9I | Cfr42I |
| ClaI | CpoI | CsiI | CspI | Csp45I | CspAI | Eco31I |
| Eco72I | Eco81I | Eco105I | EcoT22I | FalI | FauNDI | FseI |
| I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI | KspI | MabI | MauBI |
| MfeI | MlsI | MluNI | Mph1103I | MreI | MscI | Msp20I |
| MspCI | MssI | MunI | Mva1269I | Nb.BbvCI | Nb.BsmI | Nb.Mva1269 |
| NdeI | NheI | NruI | NsiI | NspV | Nt.BbvCI | OliI |
| PacI | PalAI | PasI | PctI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI |
| PinAI | PmaCI | PmeI | PmlI | PspCI | PspLI | PsrI |
| RgaI | RigI | RruI | RsrII | Rsr2I | SacII | SanDI |
| SbfI | SdaI | SexAI | SfaAI | SfiI | Sfr303I | SfuI |
| SgfI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SmaI | SmiI | SnaBI |
| SpeI | SrfI | Sse8387I | SspBI | SstII | SwaI | TspMI |
| Vha464I | XmaI | XmaCI | XmaJI | ZraI | Zsp2I |
pET-N-Avi-His-SUMO3中的单酶切位点包括：
| Acc65I | G`GTAC,C | 168 | KpnI | G`GCGC,C | 172 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2064 | MluI | A`CGCG,T | 5053 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2543 | NotI | GC`GGCC,GC | 509 |
| ApaI | G,GGCC`C | 4850 | PaeR7I | C`TCGA,G | 517 |
| AvaI | C`YCGR,G | 517 | PciI | A`CATG,T | 2952 |
| BamHI | G`GATC,C | 477 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3210 |
| BclI | T`GATC,A | 5039 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 5478 |
| BglII | A`GATC,T | 1 | PpuMI | RG`GWC,CY/td> | 3947 |
| BmgBI | CAC|GTC | 455 | PshAI | GACNN|NNGTC | 4212 |
| BseRI | GAGGAG 16/14 | 225 | PsiI | TTA|TAA | 1049 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 517 | PspOMI | G`GGCC,C | 4846 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 3069 | PspXI | VC`TCGA,GB | 517 |
| BssHII | G`CGCG,C | 4642 | PstI | C,TGCA`G | 1822 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5377 | PvuI | CG,AT`CG | 1695 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 4871 | SacI | G,AGCT`C | 493 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 3185 | SalI | G`TCGA,C | 496 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 924 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 3069 |
| EagI | C`GGCC,G | 509 | ScaI | AGT|ACT | 1583 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 491 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5734 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 5521 | SphI | G,CATG`C | 5586 |
| EcoRI | G`AATT,C | 483 | StuI | AGG|CCT | 336 |
| EcoRV | GAT|ATC | 4607 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3210 |
| HindIII | A`AGCT,T | 502 | XbaI | T`CTAG,A | 67 |
| HpaI | GTT|AAC | 4551 | XhoI | C`TCGA,G | 517 |
pET-N-Avi-His-SUMO3质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7-R (21-40): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-N-Avi-His-SUMO3的全序列信息：D3007 pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒)全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3007-1µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 | 1µg |
| D3007-100µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3002-1µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3002-100µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3005-1µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3005-100µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3007-1µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3007-100µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3009-1µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3009-100µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3011-1µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3011-100µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3013-1µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3013-100µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3015-1µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3015-100µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3017-1µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3017-100µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
