pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒带有两组T7启动子/lac操作子和核糖体结合位点(ribosome binding site, RBS) ，其中一组的多克隆位点(multiple cloning sites，MCS)前有His标签(His tag)和Avi标签(Avi tag)，另一组用于表达带有S标签(S tag)的生物素连接酶(biotin ligase) BirA，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白和BirA的共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下，细胞内表达的生物素连接酶BirA催化Biotin共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签(Avi tag)是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，生物素连接酶BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强。
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position | T7-1 promoter | 6362-6378 |
| His tag | 77-94 |
| Avi tag | 101-145 |
| Multiple Cloning Sites | 152-202 |
| T7-2 promoter | 260-278 |
| BirA | 349-1311 |
| S tag | 1324-1368 |
| T7 Terminator | 1420-1467 |
| f1 origin | 1504-1959 |
| Ampicillin | 2074-2934 |
| ori | 3108-3696 |
| lacI | 4889-5971 |
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA质粒(6378bp)的图谱如下：
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3011 pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒).pdf
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA中没有的酶切位点包括：
| AatI | AatII | AbsI | Acc65I | AcvI | AgeI | AhlI |
| AjiI | AleI | AsiGI | AsiSI | Asp718I | AsuII | AsuNHI |
| BaeI | BbrPI | BcuI | BglII | BmgBI | BmtI | BoxI |
| BplI | Bpu14I | BshTI | BsiWI | Bsp68I | Bsp119I | BspOI |
| BspT104I | BstBI | BstPAI | BstSNI | BtrI | BtuMI | Cfr9I |
| Cfr42I | CpoI | CspI | Csp45I | CspAI | CspCI | Eco32I |
| Eco72I | Eco105I | Eco147I | EcoRV | EcoT22I | FalI | FseI |
| FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KpnI | KspI | MabI |
| MauBI | MfeI | Mph1103I | MreI | MssI | MunI | NheI |
| NruI | NsiI | NspV | OliI | PceI | Pfl23II | PI-PspI |
| PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI | PmlI | PshAI | PspCI |
| PspLI | PsrI | RgaI | RigI | RsrII | Rsr2I | SacII |
| SanDI | SexAI | SfaAI | SfiI | Sfr303I | SfuI | SgfI |
| SgrBI | SgrDI | SmaI | SmiI | SnaBI | SpeI | SrfI |
| SseBI | SstII | StuI | SwaI | TspMI | XmaI | XmaCI |
| ZraI | Zsp2I |
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA中的单酶切位点包括：
| AarI | CACCTGCNNNN`NNNN, | 1127 | NcoI | C`CATG,G | 69 |
| AflII | A`CRYG,T | 209 | NdeI | CA`TA,TG | 344 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2147 | NotI | GC`GGCC,GC | 196 |
| AscI | GG`CGCG,CC | 171 | PacI | TTA,AT`TAA | 1387 |
| AvrII | C`CTAG,G | 1391 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1312 |
| BamHI | G`GATC,C | 152 | PasI | CC`CWG,GG | 432 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 829 | PciI | A`CATG,T | 3752 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 1409 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4010 |
| BsmI | GAATG,CN` | 555 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4747 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 3869 | PsiI | A`CATG,T | 1862 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 236 | PspXI | VC`TCGA,GB | 1312 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5940 | PvuI | CG,AT`CG | 2517 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 5434 | SacI | G,AGCT`C | 168 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 3985 | SalI | G`TCGA,C | 183 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 1294 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 3869 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 1737 | ScaI | AGT|ACT | 2627 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 166 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 6297 |
| EcoRI | G`AATT,C | 158 | SphI | G,CATG`C | 9149 |
| FspI | TGC|GCA | 2369 | SspI | AAT|ATT | 1942 |
| HindIII | A`AGCT,T | 189 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4010 |
| HpaI | GTT|AAC | 5114 | XbaI | T`CTAG,A | 30 |
| MluI | A`CGCG,T | 5616 | XhoI | C`TCGA,G | 1312 |
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
T7-R (259-279): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA的全序列信息：D3011 pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA序列信息.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3011-1µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA | 1μg |
| D3011-100µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2971-1µg | pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA | 1µg |
| D2971-100µg | pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA | 100µg |
| D2973-1µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo | 1µg |
| D2973-100µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo | 100µg |
