pET-Dual-N-His-TEV (双蛋白原核表达质粒)
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产品编号 D2934-100μg
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1μg 100μg
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pET-Dual-N-His-TEV是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒。本质粒表达的两种目的蛋白中,其中一种可以带上His标签并且His标签后有TEV蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点(Ribosome binding site, rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。

在共表达两个目的蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过镍柱纯化,可分离纯化获得带有His标签的蛋白复合物。本质粒的N端His标签与第一个多克隆位点之间有TEV蛋白酶识别的七肽序列ENLYFQG,对应的核酸序列为GAGAACCTGTACTTCCAAGGG,因此可在目的蛋白复合物纯化后可用TEV蛋白酶切除克隆在第一个多克隆位点目的蛋白的N端的His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除His标签的时候第一个多克隆位点目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端His标签和TEV识别位点的目的蛋白。

pET-Dual-N-His-TEV质粒(5438bp)的图谱如下:

pET-Dual-N-His-TEV质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
lac operator-1 3-27
His-taq 74-103
TEV site sequence 104-124
Multiple cloning sites-1 (BamHI-NotI) 125-168
T7 promoter-2 232-250
lac operator-2 251-275
Multiple cloing sites-2 (NdeI-XhoI) 316-372
S Tag coding sequence 384-428
T7 terminator 480-527
f1 origin 564-1019
AmpR coding sequence 1134-1994
pBR322 origin 2168-2756
lacI coding sequence 3949-5031
T7 promoter-1 5422-5438

pET-Dual-N-His-TEV的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2934 pET-Dual-N-His-TEV.pdf

pET-Dual-N-His-TEV中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-His-TEV)包括:

AgeI AleI BbvCI BmgBI BmtI BseRI BsiWI
BsmI BstBI Bsu36I CspCI MscI NcoI NheI
NruI PaqCI PmeI PmlI PshAI RsrII SacII
SexAI SfiI SmaI SnaBI SpeI SrfI StuI
SwaI TspMI XmaI

pET-Dual-N-His-TEV中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-His-TEV)包括:

AatII G,ACGT`C 364 EcoRV GAT|ATC 337
Acc65I G`GTAC,C 366 FseI GG,CCGG`CC 342
AflII C`TTAA,G 181 FspI TGG|CCA 1429
AhdI GACNN,N`NNGTC 1206 HindII A`AGCT,T 162
AlwNI CAG,NNN`CTG 2400 HpaI GTT|AAC 4174
ApaI G,GGCC`C 4469 KpnI G,GTAC`C 366
AscI GG`CGCG,CC 144 MfeI C`TCGA,G 329
AsiSI GCG,AT`CGC 353 MluI A`CGCG,T 4676
AvaI C`YCGR,G 376 NdeI CA`TA,TG 316
AvrII C`CTAG,G 451 NotI GC`GGCC,GC 169
BaeI ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` 345 NsiI A,TGCA`T 71
BamHI G`GATC,C 125 PacI TTA,AT`TAA 445
BclI T`GATC,A 4662 PaeR7I C`TCGA,G 372
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 143 PciI A`CATG,T 2812
BglI GCCN,NNN`NGGC 1324 PflFI GACN`N,NGTC 3070
BlpI GC`TNA,GC 469 PsiI TTA|TAA 922
Bpu10I CC`TNA,GC 3707 PspOMI G`GGCC,C 4469
BsaI GGTCTCN`NNNN, 1268 PspXI VC`TCGA,GB 372
BsoBI C`YCGR,G 372 PstI C,TGCA`G 150
BspDI AT`CG,AT 5401 SacI G,AGCT`C 137
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 143 SalI G`TCGA,C 156
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2929 SapI GCTCTTCN`NNN, 2929
BsrGI T`GTAC,A 208 SbfI CC,TGCA`GG 150
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4997 ScaI AGT|ACT 1687
BstEII G`GTNAC,C 4494 SgrAI CR`CCGG,YG 5357
BstZ17I GTA|TAC 3045 SphI G,CATG`C 5205
BtgI C`CRYG,G 5239 SspI AAT|ATT 1002
ClaI AT`CG,AT 5401 Tth111I GACN`N,NGTC 3070
DraIII CAC,NNN`GTG 794 XbaI T`CTAG,A 30
Eco53kI GAG|CTC 139 XhoI C`TCGA,G 372
EcoNI CCTNN`N,NNAGG 5144 ZraI GAC|GTC 362
EcoRI G`AATT,C 131

pET-Dual-N-His-TEV质粒可使用的测序引物序列如下:

MCS1-N Primer (5391-5409): 5'-AGGATCGAGATCGATCTCG-3'

MCS1-C Primer (226-207): 5'-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3'

MCS2-N Primer (207-226): 5'-TTGTACACGGCCGCATAATC-3'

pET-Dual-N-His-TEV的全序列信息:D2934 pET-Dual-N-His-TEV.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2934-1µg pET-Dual-N-His-TEV 1µg
D2934-100µg pET-Dual-N-His-TEV 100µg
说明书 1份
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切等后续用途。
3.pET-Dual-N-His-TEV质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转化入表达菌株。
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