pET-N-His-SUMO3-Avi是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达可被生物素标记的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒由T7启动子驱动N端带有His标签(His tag)、SUMO3标签(SUMO3 tag)以及Avi标签(Avi tag)的目的蛋白。在ATP、生物素(Biotin)以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA存在的体外条件下，BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而对目的蛋白进行生物素标记。同时，本质粒带有SUMO3标签，可被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现相应标签蛋白与目的蛋白的高效分离。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是广泛存在于真核生物的蛋白家族。和泛素化(Ubiquitination)类似，类泛素蛋白修饰分子通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞核到细胞膜的运输、转录调控、细胞凋亡、蛋白质的稳定、压力应激和细胞周期的调控等[2]。
SUMO3标签源自人SUMO3基因，在大肠杆菌体系中SUMO3标签可以作为分子伴侣帮助目的蛋白在表达过程中正确折叠，提高目的蛋白的可溶性和表达量。SUMO3标签在体外可以被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现SUMO3标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留，因此SUMO3标签适用于大肠杆菌重组蛋白的表达和纯化[3]。
本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。
pET-N-His-SUMO3-Avi质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7 promoter | 21-39 |
| His tag | 114-131 |
| SUMO3 tag | 138-413 |
| Avi tag | 417-461 |
| Multiple Cloning Sites | 468-492 |
| His tag | 508-525 |
| T7 Terminator | 592-639 |
| f1 origin | 676-1131 |
| Ampicillin | 1262-2122 |
| ori | 2293-2881 |
| lacI | 4311-5393 |
pET-N-His-SUMO3-Avi质粒(5759bp)的图谱如下：
pET-N-His-SUMO3-Av表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3009 pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒).pdf。
pET-N-His-SUMO3-Avi中没有的酶切位点包括：
| AarI | AatII | AbsI | Acc36I | Acc65I | AcvI | AflII |
| AgeI | AhlI | AjuI | AleI | AscI | AsiGI | AsiSI |
| Asp718I | AspA2I | AsuNHI | AvrII | AxyI | BaeI | BalI |
| BanIII | BbrPI | BbvCI | BcuI | BfrI | BfuAI | BlnI |
| BmtI | BplI | BsaI | Bsa29I | BsaMI | Bse21I | BseCI |
| BshVI | BshTI | BsiWI | BsmI | Bso31I | Bsp68I | Bsp1407I |
| BspDI | BspMI | BspOI | BspTI | BspTNI | BspXI | BsrGI |
| Bst98I | BstAFI | BstAUI | BstSNI | Bsu15I | Bsu36I | BsuTUI |
| BtuMI | BveI | Cfr9I | Cfr42I | ClaI | CpoI | CsiI |
| CspI | CspAI | Eco31I | Eco72I | Eco81I | Eco105I | EcoT22I |
| FalI | FauNDI | FseI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI |
| KpnI | KspI | MabI | MauBI | MfeI | MlsI | MluNI |
| Mph1103I | MreI | MscI | Msp20I | MspCI | MssI | MunI |
| Mva1269I | Nb.BbvCI | Nb.BsmI | Nb.Mva1269 | NdeI | NheI | NruI |
| NsiI | Nt.BbvCI | OliI | PacI | PalAI | PasI | PctI |
| Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI | PmlI |
| PspCI | PspLI | PsrI | RgaI | RigI | RruI | RsrII |
| Rsr2I | SacII | SanDI | SbfI | SdaI | SexAI | SfaAI |
| SfiI | Sfr303I | SgfI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SmaI |
| SmiI | SnaBI | SpeI | SrfI | Sse8387I | SspBI | SstII |
| SwaI | TspMI | Vha464I | XmaI | XmaCI | XmaJI | ZraI |
| Zsp2I |
pET-N-His-SUMO3-Avi中的单酶切位点包括：
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2049 | HpaI | GTT|AAC | 4536 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2528 | MluI | A`CGCG,T | 5038 |
| ApaI | G,GGCC`C | 4835 | NcoI | C`CATG,G | 106 |
| AvaI | C`YCGR,G | 502 | NotI | GC`GGCC,GC | 494 |
| BamHI | G`GATC,C | 411 | PaeR7I | C`TCGA,G | 502 |
| BclI | T`GATC,A | 5024 | PciI | A`CATG,T | 2937 |
| BglII | A`GATC,T | 1 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3195 |
| BmgBI | CAC|GTC | 389 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 5463 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 3832 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3932 |
| BseRI | GAGGAG 16/14 | 159 | PshAI | GACNN|NNGTC | 4197 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 502 | PsiI | TTA|TAA | 1034 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 3054 | PspOMI | G`GGCC,C | 4831 |
| BssHII | G`CGCG,C | 4627 | PspXI | VC`TCGA,GB | 502 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5362 | PstI | C,TGCA`G | 1807 |
| BstBI | TT`CG,AA | 433 | PvuI | CG,AT`CG | 1680 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 4856 | SacI | G,AGCT`C | 478 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 3170 | SalI | G`TCGA,C | 481 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 909 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 3054 |
| EagI | C`GGCC,G | 494 | ScaI | AGT|ACT | 1568 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 476 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5719 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 5506 | SphI | G,CATG`C | 5571 |
| EcoRI | G`AATT,C | 468 | StuI | AGG|CCT | 270 |
| EcoRV | GAT|ATC | 4592 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3195/td> |
| FspAI | TGC|GCA | 3960 | XbaI | T`CTAG,A | 67 |
| HindIII | A`AGCT,T | 487 | XhoI | C`TCGA,G | 502 |
pET-N-His-SUMO3-Avi质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7-R (21-39): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-N-His-SUMO3-Avi的全序列信息：D3009 pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒)全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3009-1µg | pET-N-His-SUMO3-Avi | 1µg |
| D3009-100µg | pET-N-His-SUMO3-Avi | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3002-1µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3002-100µg | pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3005-1µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3005-100µg | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3007-1µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3007-100µg | pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3009-1µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 1µg |
| D3009-100µg | pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) | 100µg |
| D3011-1µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3011-100µg | pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3013-1µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3013-100µg | pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3015-1µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3015-100µg | pET-Dual-Avi-His-SUMO3-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 100µg |
| D3017-1µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
| D3017-100µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) | 1µg |
