pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒由CMV启动子驱动带有3X Flag标签(3X Falg tag)、SUMOEU1标签(SUMOEU1 tag)及Avi标签(Avi tag)的目的蛋白以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA通过IRES序列共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下，细胞内表达的生物素连接酶BirA催化生物素共价结合到目的蛋白C端的Avi标签上，从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。同时，本质粒带有SUMOEU1标签，可被rSENPEUH蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现相应标签蛋白与目的蛋白的高效分离。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是广泛存在于真核生物的蛋白家族。和泛素化(Ubiquitination)类似，类泛素蛋白修饰分子通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞核到细胞膜的运输、转录调控、细胞凋亡、蛋白质的稳定、压力应激和细胞周期的调控等[2]。
SUMOEU1标签作为SUMO的突变体，在真核细胞中可以提高目的蛋白的可溶性和稳定性，但是SUMOEU1标签融合的目的蛋白不参于SUMO相关的细胞调控，也不会被内源性的去泛素化酶切割。SUMOEU1标签在体外可以被rSENPEUH蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现3X Flag标签、SUMOEU1标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留，因此SUMOEU1标签适用于真核细胞重组蛋白的表达和纯化[3]。
内部核糖体进入位点序列(Internal ribosome entry site, IRES)是一段茎环结构序列，在上游启动子的控制下IRES连接的两个基因转录成为一条mRNA，在翻译时IRES可以单独招募核糖体，实现IRES上、下游两个不同基因的共表达。通常下游基因的表达要相对弱一些。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性，可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。而在转染哺乳动物细胞后，可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致，但G418的细胞毒性更低。
本质粒在N端3X Flag标签与SUMOEU1标签之间含有HRV 3C蛋白酶识别的八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，因此可在目的蛋白纯化后用HRV 3C蛋白酶切除N端的3X Flag标签。由于HRV 3C蛋白酶酶切发生在八肽序列的Gln和Gly之间，所以在酶切去除3X Flag标签的时候目的蛋白的N端会留下两个额外的氨基酸残基Gly和Pro。
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 50-633 |
| 3xFlag tag | 739-804 |
| HRV 3C site | 823-846 |
| SUMO EU1 tag | 847-1119 |
| Multiple cloning site | 1117-1146 |
| Avi tag | 1147-1191 |
| IRES | 1206-1762 |
| BirA | 1769-2737 |
| WPRE | 2749-3337 |
| HSV-thymidine Kinase (TK) poly(A) signal | 3403-3451 |
| f1 ori | 3653-4081 |
| SV40 ori | 4725-4410 |
| Neomycin | 4491-5285 |
| SV40 poly(A) signal | 5461-5582 |
| lac operator | 5655-5671 |
| CAP binding site | 5724-5745 |
| ori | 6033-6621 |
| Ampicillin | 6792-7652 |
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (7973bp)的图谱如下：
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2981 pCMV-N-3X Flag-SUMO_EU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒).pdf。
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA中没有的酶切位点包括：
| AbsI | AfeI | AflII | AgeI | AleI | Aor51HI | AscI |
| AsiGI | AsiSI | AsuII | AsuNHI | BaeI | BarI | BfrI |
| BlpI | BmtI | BoxI | Bpu14I | Bpu1102I | BsgI | BshTI |
| BsiWI | Bsp119I | Bsp1407I | Bsp1720I | BspOI | BspTI | BspT104I |
| BsrGI | Bst98I | BstAFI | BstAUI | BstBI | BstEII | BstHPI |
| BstPI | BstPAI | CelII | Csp45I | CspAI | Eco47III | Eco91I |
| EcoO65I | FseI | FspAI | HpaI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI |
| KflI | KspAI | MauBI | MreI | MspCI | MssI | NheI |
| NspV | OliI | PacI | PalAI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI |
| PinAI | PmeI | PpuMI | PshAI | Psp5II | PspEI | PspLI |
| PspPPI | PsrI | RgaI | RigI | SanDI | SfaAI | SfiI |
| SfuI | SgfI | SgrAI | SgsI | SmiI | SrfI | SspBI |
| SwaI | TstI | Vha464I |
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA中的单酶切位点包括：
| Acc65I | G`GTAC,C | 1635 | NotI | GC`GGCC,GC | 1199 |
| BamHI | G`GATC,C | 1117 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1135 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 2252 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4737 |
| BmgBI | CAC|GTC | 1737 | PmlI | CAC|GTG | 1510 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 654 | PspXI | VC`TCGA,GB | 1135 |
| BspDI | AT`CG,AT | 2646 | PvuI | CG,AT`CG | 7235 |
| BspEI | T`CCGG,A | 716 | RsrII | CG`GWC,CG | 5135 |
| BssHII | G`CGCG,C | 5016 | SacI | G,AGCT`C | 633 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 2000 | SacII | CC,GC`GG | 3252 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 5593 | SbfI | CC,TGCA`GG | 2451 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 2717 | ScaI | AGT|ACT | 7345 |
| ClaI | AT`CG,AT | 2646 | SexAI | A`CCWGG,T | 4176 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 631 | SgrDI | CG`TCGA,CG | 7786 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 2450 | SmaI | CCC|GGG | 4432 |
| EcoRI | G`AATT,C | 724 | SnaBI | TAC|GTA | 405 |
| EcoRV | GAT|ATC | 2740 | SspI | AAT|ATT | 7669 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN, | 654 | StuI | AGG|CCT | 4408 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1418 | TspMI | C`CCGG,G | 4430 |
| KpnI | G`GCGC,C | 1639 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4737 |
| MfeI | C`AATT,G | 7949 | XbaI | T`CTAG,A | 1129 |
| MluI | A`CGCG,T | 43 | XhoI | C`TCGA,G | 1135 |
| NdeI | CA`TA,TG | 299 | XmaI | C`CCGG,G | 4430 |
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
CMV-F (584-603): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGT-3'
pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA的全序列信息 D2981 pCMV-N-3X Flag-SUMO_EU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒).txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2981-1µg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA | 1µg |
| D2981-100µg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2971-1µg | pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 1µg |
| D2971-100µg | pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 100µg |
| D2973-1µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo (Avi标签质粒) | 1µg |
| D2973-100µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo (Avi标签质粒) | 100µg |
| D2975-1µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-Neo (Avi标签质粒) | 1µg |
| D2975-100µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-Neo (Avi标签质粒) | 100µg |
| D2977-1µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 1µg |
| D2977-100µg | pCMV-N-3X Flag-Avi-SUMOEU1-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 100µg |
| D2979-1µg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi (Avi标签质粒) | 1µg |
| D2979-100µg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi (Avi标签质粒) | 100µg |
| D2981-1µg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 1µg |
| D2981-100µg | pCMV-N-3X Flag-SUMOEU1-MCS-Avi-IRES-BirA (生物素标记质粒) | 100µg |
