pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒由CMV启动子驱动带有3X Flag tag和Avi tag(Avi标签)的目的蛋白以及生物素连接酶(BirA)通过IRES序列共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下，细胞内表达的生物素连接酶BirA催化Biotin共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。

Avi标签(Avi-tag)是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，生物素连接酶(biotin ligase) BirA在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强。

内部核糖体进入位点序列(Internal Ribosome Entry Site, IRES)是一段茎环结构序列，在上游启动子的控制下IRES连接的两个基因转录成为一条mRNA，在翻译时IRES可以单独招募核糖体，实现IRES上、下游两个不同基因的共表达。通常下游基因的表达要相对弱一些。

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA质粒的主要信息如下：

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA质粒(7703bp)的图谱如下：

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2971 pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒).pdf。

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA中没有的酶切位点包括：

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA中的单酶切位点包括：

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

CMV-F (583-603): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGT-3'

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA的全序列信息：D2971 pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA.txt。

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本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。