pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒)
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产品编号 D2971-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒由CMV启动子驱动带有3X Flag tag和Avi tag(Avi标签)的目的蛋白以及生物素连接酶(BirA)通过IRES序列共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下,细胞内表达的生物素连接酶BirA催化Biotin共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上,从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。

Avi标签(Avi-tag)是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签,在ATP和生物素存在的条件下,生物素连接酶(biotin ligase) BirA在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素,从而实现目的蛋白的生物素标记。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小,只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记,生物素标记效率高,可重复性好;体内或体外均可进行标记,标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高,从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等;相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记,BirA催化的反应条件更温和,对被标记蛋白活力影响小,酶活效率高,标记特异性强。

内部核糖体进入位点序列(Internal Ribosome Entry Site, IRES)是一段茎环结构序列,在上游启动子的控制下IRES连接的两个基因转录成为一条mRNA,在翻译时IRES可以单独招募核糖体,实现IRES上、下游两个不同基因的共表达。通常下游基因的表达要相对弱一些。

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 50-633
Flag Tag 739-804
HRV 3C site 823-846
Avi Tag 859-903
Multiple cloning site 910-929
IRES 936-1492
BirA 1499-2467
WPRE 2479-3067
HSV-thymidine Kinase (TK) poly(A) signal 3133-3181
SV40 promoter 3825-4154
Neomycin 4221-5015
SV40 poly(A) signal 5191-5312
ori 5763-6351
Ampicillin 6522-7382

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA质粒(7703bp)的图谱如下:

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2971 pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA (生物素标记质粒).pdf

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA中没有的酶切位点包括:

AfeI AflII AgeI AleI Aor51HI AscI AsiGI
AsiSI AsuII AsuNHI BaeI BarI BfrI BlpI
BmtI BoxI Bpu14I Bpu1102I BsgI BshTI BsiWI
Bsp119I Bsp1407I Bsp1720I BspOI BspTI BspT104I BsrGI
Bst98I BstAFI BstAUI BstBI BstEII BstHPI BstPI
BstPAI CelII Csp45I CspAI Eco47III Eco91I EcoO65I
FseI FspAI HpaI I-CeuI I-PpoI I-SceI KspAI
MauBI MreI MspCI MssI NheI NspV OliI
PacI PalAI Pfl23II PI-PspI PI-SceI PinAI PmeI
PpuMI PshAI Psp5II PspEI PspLI PspPPI PsrI
RgaI RigI SanDI SfaAI SfiI SfuI SgfI
SgrAI SgsI SmiI SrfI SspBI SwaI TstI
Vha464I

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA中的单酶切位点包括:

Acc65I G`GTAC,C 1365 AhdI GACNN,N`NNGTC 6595
BamHI G`GATC,C 910 BbvCI CC`TCA,GC 1982
BmgBI CAC|GTC 1467 BsmBI CGTCTC 7/11 654
BssHII G`CGCG,C 4746 BstXI CCAN,NNNN`NTGG 1730
BstZ17I GTA|TAC 323 Bsu36I CC`TNA,GG 2447
ClaI AT`CG,AT 2376 Eco53kI GAG|CTC 631
EcoNI CCTNN`N,NNAGG 2180 EcoRI G`AATT,C 724
EcoRV GAT|ATC 2470 HindIII A`AGCT,T 1148
KpnI G,GTAC`C 1369 MfeI C`AATT,G 7679
MluI A`CGCG,T 43 NdeI CA`TA,TG 299
NotI GC`GGCC,GC 929 PflFI GACN`N,NGTC 4467
PmlI CAC|GTG 1240 PvuI CG,AT`CG PspXI 6965
RsrII CG`GWC,CG 4865 SacI G,AGCT`C 633
SacII CC,GC`GG 2982 SbfI CC,TGCA`GG 2181
ScaI AGT|ACT 7075 SmaI CCC|GGG 4162
SnaBI TAC|GTA 405 SspI AAT|ATT 7399
StuI AGG|CCT 4138 TspMI C`CCGG,G 4160
Tth111I GACN`N,NGTC 4467 XbaI T`CTAG,A 922
XhoI C`TCGA,G 847 XmaI C`CCGG,G 4160

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

CMV-F (583-603): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGT-3'

pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA的全序列信息:D2971 pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2971-1µg pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA 1µg
D2971-100µg pCMV-3X Flag-Avi-MCS-IRES-BirA 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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