pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo (Avi标签质粒)
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产品编号 D2973-100μg
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¥ 1169.00
产品包装:
1μg 100μg
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pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达可被生物素标记的目的蛋白的质粒。该质粒由CMV启动子驱动带有3X Flag tag和Avi tag (Avi标签)的目的蛋白。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下,生物素连接酶(biotin ligase) BirA可以催化Biotin共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上,从而在体内或体外对目的蛋白进行生物素标记。在多克隆位点的5’端还含有一个编码3XFlag标签的序列,这样可以表达同时含有Flag标签和Avi标签的融合蛋白,在可以进行生物素标记的同时,也可以方便地使用Flag标签抗体来识别目的蛋白,从而便于目的蛋白检测和分离纯化。

Avi标签(Avi-tag)是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签,在ATP和生物素存在的条件下,生物素连接酶BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素,从而实现目的蛋白的生物素标记。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小,只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记,生物素标记效率高,可重复性好;体内或体外均可进行标记,标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高,从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等;相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记,BirA催化的反应条件更温和,对被标记蛋白活力影响小,酶活效率高,标记特异性强。

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (ST081/ST081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和Neomycin效果一致,但G418的细胞毒性更低。

本质粒在N端3X Flag标签与Avi标签之间含有HRV 3C蛋白酶识别的八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,因此可在目的蛋白纯化后用HRV 3C蛋白酶切除N端的3X Flag标签。HRV 3C蛋白酶酶切发生在八肽序列的Gln和Gly之间,因此在酶切去除3X Flag标签的时候目的蛋白的N端会留下两个额外的氨基酸残基Gly和Pro。

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 50-633
3X Flag tag 739-804
HRV 3C site 823-846
Avi tag 859-903
Multiple cloning site 910-929
WPRE 979-1567
HSV-thymidine Kinase(TK) polyA signal 1633-1681
f1 origin 1883-2311
SV40 ori 2505-2640
Neomycin 2721-3515
SV40 poly(A) signal 3691-3812
lac operator 3885-3901
CAP binding site 3954-3975
ori 4263-4851
Ampicillin 5022-5882

pCMV-3X Flag-Avi-MCS质粒(6203bp)的图谱如下:

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2973 pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo (Avi标签质粒).pdf

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo中没有的酶切位点包括:

AarI Acc65I AcvI AfeI AflII AgeI AjiI
AjuI AleI Aor51HI AscI AsiGI AsiSI Asp718I
AsuII AsuNHI AxyI BaeI BanIII BarI BbrPI
BbvCI BfrI BlpI BmgBI BmtI BoxI Bpu14I
Bpu1102I Bsa29I Bse21I BseCI BsgI BshVI BshTI
BsiWI Bsp119I Bsp1407I Bsp1720I BspDI BspOI BspTI
BspT104I BspXI BsrGI Bst98I BstAFI BstAUI BstBI
BstEII BstENI BstHPI BstPI BstPAI BstXI Bsu15I
Bsu36I BsuTUI BtrI CelII ClaI Csp45I CspAI
Eco47III Eco72I Eco81I Eco91I EcoNI EcoO65I FseI
FspAI HindIII HpaI I-CeuI I-PpoI I-SceI KpnI
KspAI MauBI MreI MspCI MssI NheI NspV
OliI PacI PalAI Pfl23II PI-PspI PI-SceI PinAI
PmaCI PmeI PmlI PpuMI PshAI Psp5II PspCI
PspEI PspLI PspPPI PsrI RgaI RigI SanDI
SbfI SdaI SfaAI SfiI SfuI SgfI SgrAI
SgsI SmiI SrfI Sse8387I SspBI SwaI TstI
Vha464I XagI XcmI

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo中的单酶切位点包括:

AbsI CC`TCGA,GG 847 PciI A`CATG,TC 4202
AhdI GACNN,N`NNGTC 5095 PflFI GACN`N,NGTC 2967
ApaI G,GGCC`C 844 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1220
AvrII C`CTAG,G 2639 PluTI G,GCGC`C 2852
BamHI 910 PspOMI Bsu36I G`GGCC,C 840
BclI T`GATC,A 2690 PspXI VC`TCGA,GB 847
Bpu10I CC`TNA,GC 6198 PstI C,TGCA`G 2902
BsmI GAATG,CN` 3771 PvuI CG,AT`CG 5465
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 654 RsrII CG`GWC,CG 3365
BspEI T`CCGG,A 716 SacI G,AGCT`C 633
BssHII G`CGCG,C 3246 SacII CC,GC`GG 1482
BstZ17I GTA|TAC 3823 SexAI A`CCWGG,T 2406
DraIII CAC,NNN`GTG 2116 SfoI GGC|GCC 2850
Eco53kI GAG|CTC 631 SgrDI CG`TCGA,CG 6016
EcoRI G`AATT,C 724 SmaI CCC|GGG 2662
EcoRV GAT|ATC 970 SnaBI TAC|GTA 405
KasI G`GCGC,C 2848 SspI AAT|ATT 5899
MfeI C`AATT,G 6179 StuI AGG|CCT 2638
MluI A`CGCG,T 43 TspMI C`CCGG,G 2660
MscI TGG|CCA 2931 Tth111I GACN`N,NGTC 2967
NarI GG`CG,CC 2849 XbaI T`CTAG,A 922
NdeI CA`TA,TG 299 XhoI C`TCGA,G 847
NotI GC`GGCC,GC 929 XmaI C`CCGG,G 2660
PaeR7I C`TCGA,G 847

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

CMV-F (583-603): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGT-3'

pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo的全序列信息:D2973 pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2973-1µg pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo 1µg
D2973-100µg pCMV-N-3X Flag-Avi-Neo 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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