pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达N端带有Myc标签(Myc Tag, EQKLISEEDL)的目的蛋白、增强绿色荧光蛋白EGFP和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性基因的表达质粒。
本质粒含有CMV启动子可以高效启动目的基因的表达；可以方便地使用抗Myc标签的抗体(AF5054/AF0033/AM933/AM926)来检测目的蛋白；同时可以通过P2A共表达增强绿色荧光蛋白EGFP，便于通过EGFP的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。
图1. 碧云天pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。
本质粒在多克隆位点和EGFP的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Blasticidin S (ST018)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AmpR | 63-923 |
| AmpR promoter | 924-1016 |
| CMV enhancer | 1101-1404 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter | 1654-1672 |
| Myc | 1713-1742 |
| P2A | 1812-1877 |
| EGFP | 1878-2597 |
| T7 promoter | 2649-2667 |
| SV40 poly(A) signal | 2941-3062 |
| f1 ori | 3069-3524 |
| AmpR promoter | 3551-3655 |
| SV40 promoter | 3657-4014 |
| SV40 ori | 3865-4000 |
| BSD | 4049-4447 |
| HSV TK poly(A) signal | 4679-4726 |
| ori | 5055-5643 |
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒(5751bp)的图谱如下：
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla的多克隆位点的详细图谱如下：https://www.beyotime.com/Manual/D2808 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla.pdf。
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla中没有的酶切位点包括：
| AarI | AbsI | AccIII | AccB7I | AcvI | AfeI | AflII |
| AgeI | Aor13HI | Aor51HI | AscI | AsiGI | AsiSI | AspI |
| BaeI | BbeI | BbrPI | BbvCI | BfrI | BoxI | BseAI |
| BsePI | BshTI | BsiWI | Bsp13I | BspEI | BspQI | BspTI |
| BssHII | BssNAI | Bst98I | Bst1107I | BstAFI | BstEII | BstENI |
| BstPI | BstPAI | BstZ17I | CpoI | CspI | CspAI | |
| Eco47III | Eco72I | Eco91I | EcoNI | EcoO65I | EgeI | EheI |
| FseI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KasI | Kpn2I |
| LguI | MauBI | Mly113I | MreI | MroI | MspCI | MssI |
| NarI | PalAI | PauI | PciSI | Pfl23II | PflFI | PflMI |
| PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PluTI | PmaCI | PmeI | PmlI |
| PshAI | PspCI | PspEI | PspLI | PspXI | PsrI | PsyI |
| RgaI | RigI | RsrII | Rsr2I | SanDI | SapI | SbfI |
| SdaI | SfaAI | SfoI | SgfI | SgrAI | SgrDI | SgsI |
| SmiI | Sse8387I | SspDI | SwaI | Tth111I | Van91I | Vha464I |
| XagI | XcmI |
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla中的单酶切位点包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1783 | MluI | A`CGCG,T | 3063 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 136 | MscI | TGG|CCA | 4052 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2602 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| BamHI | G`GATC,C | 1752 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BbsI | GAAGACNN`NNNN, | 4134 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BclI | T`GATC,A | 2834 | NruI | TCG|CGA | 4280 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 4499 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1794 |
| BglII | A`GATC,T | 1788 | PciI | A`CATG,T | 5699 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 4444 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4208 |
| BmgBI | CAC|GTC | 1856 | PspOMI | G`GGCC,C | 2598 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1635 | PstI | C,TGCA`G | 1768 |
| BsaXI | ,NNN`(N)9ACNNNNNCTCC(N)7,NNN` | 3227 | SacI | G,AGCT`C | 1689 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 1846 | SacII | CC,GC`GG | 1696 |
| BspDI | AT`CG,AT | 4017 | SalI | G`TCGA,C | 1782 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 4499 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 2587 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3952 |
| BstBI | TT`CG,AA | 4463 | SmaI | CCC|GGG | 1747 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1697 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| ClaI | AT`CG,AT | 4017 | SpeI | A`CTAG,T | 1806 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 3293 | SrfI | GCCC|GGGC | 1747 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | StuI | AGG|CCT | 3998 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1770 | TspMI | C`CCGG,G | 1745 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1778 | XbaI | T`CTAG,A | 1800 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN, | 1846 | XhoI | C`TCGA,G | 1794 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1758 | XmaI | C`CCGG,G | 1745 |
| HpaI | GTT|AAC | 2940 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
| MfeI | C`AATT,G | 2927 |
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物EGFP primer的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
EGFP primer (1880-1896): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla的全序列信息：D2808 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla 全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2808-1μg | pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla | 1µg |
| D2808-100μg | pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Bla | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
