pRL-SV40-N(报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行海肾萤光素酶(Renilla luciferase)报告基因检测的质粒,主要用于在其多克隆位点插入感兴趣的5' -UTR、启动子、增强子等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性,或用作萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)报告基因检测时的内参。也可以使用Bgl II和Pst I等位点切除SV40 early enhancer/promoter,以降低本底性的转录,并插入感兴趣的5' -UTR等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。研究3' -UTR并希望使用海肾荧光素酶时,推荐使用D2768 pRL-SV40-C。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pRL-SV40-N质粒含有SV40早期增强子和启动子,可以实现海肾萤光素酶在哺乳动物细胞内的高效表达。
pRL-SV40-N质粒携带renilla luciferase基因,编码分子量为36kD的海肾萤光素酶,翻译后无需修饰,常用于报告基因检
本质粒为氨苄抗性。
pRL-SV40-N质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
SV40 early enhancer/promoter | 7-418 |
Multiple cloning site | 421-480 |
Chimeric intron | 546-682 |
T7 RNA polymerase transcription(-17 to +2) | 726-744 |
T7 RNA polymerase transcription initiation site | 743 |
Rluc reporter gene | 754-1689 |
SV40 late polyadenylation signal | 1731-1932 |
β-lactamase (Ampr) coding region | 2079-2939 |
pRL-SV40-N质粒(3765bp)的图谱如下:
pRL-SV40-N的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2762 pRL-SV40-N(报告基因质粒).pdf。
pRL-SV40-N中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pRL-SV40-N)包括:
AatII | AgeI | AscI | BbeI | BlpI | BsgI | BsiWI |
BsmBI | BspMII | BssHII | Bst1107I | BstEII | BstXI | Bsu36I |
DraIII | Eco47III | Eco72I | EheI | EspI | FseI | KasI |
MscI | NaeI | NarI | NdeI | NgoMI | NruI | PflMI |
PmeI | PmlI | PpuMI | PspAI | RsrII | SacII | SapI |
SmaI | SnaBI | SplI | SrfI | Tth111I |
pRL-SV40-N中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pRL-SV40-N once)包括:
BglII | A`GATC,T | 1 | XcmI | CCANNNN,N`NNNNTGG | 1403 | |
Acc65I | G`GTAC,C | 54 | BsrGI | T`GTAC,A | 1452 | |
Asp718 | G`GTAC,C | 54 | BsaAI | YAC|GTR | 1486 | |
KpnI | G,GTAC`C | 58 | XbaI | T`CTAG,A | 1691 | |
PvuII | CAG|CTG | 80 | NotI | GC`GGCC,GC | 1698 | |
SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 357 | EagI | C`GGCC,G | 1698 | |
StuI | AGG|CCT | 403 | XmaIII | C`GGCC,G | 1698 | |
AvrII | C`CTAG,G | 404 | HpaI | GTT|AAC | 1841 | |
AvaI | C`YCGR,G | 426 | MunI | C`AATT,G | 1850 | |
PaeR7I | C`TCGA,G | 426 | ClaI | AT`CG,AT | 1936 | |
XhoI | C`TCGA,G | 426 | BsaBI | GATNN|NNATC | 1942 | |
SacI | G,AGCT`C | 436 | BamHI | G`GATC,C | 1943 | |
MluI | A`CGCG,T | 438 | SspI | AAT|ATT | 2061 | |
HinDIII | A`AGCT,T | 444 | Bsp1286I | G,DGCH`C | 2283 | |
EcoRI | G`AATT,C | 450 | AhaII | GR`CG,YC | 2326 | |
EcoRV | GAT|ATC | 458 | BsaHI | GR`CG,YC | 2326 | |
SalI | G`TCGA,C | 462 | HinII | GR`CG,YC | 2326 | |
AccI | GT`MK,AC | 463 | PvuI | CG,AT`CG | 2497 | |
SpeI | A`CTAG,T | 468 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 2505 | |
Bsp120I | G`GGCC,C | 474 | Cfr10I | R`CCGG,Y | 2781 | |
EcoO109I | RG`GNC,CY | 475 | BpmI | CTGGAG 22/20 | 2797 | |
ApaI | G,GGCC`C | 478 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2866 | |
PstI | C,TGCA`G | 522 | GsuI | CTGGAG 21/19` | 2796 | |
BspMI | ACCTGC 10/14 | 536 | PleI | GAGTC 9/10 | 2875 | |
NheI | G`CTAG,C | 744 | HgiEII | ACCNNNNNNGGT1/13 | 3165 | |
BsiCI | TT`CG,AA | 760 | AlwNI | CAG,NNN`CTG | 3345 | |
BstBI | TT`CG,AA | 760 | HaeII | R,GCGC`Y | 3514 |
pRL-SV40-N质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T7 Primer(726-744): TAATACGACTCACTATAGG
pRL-SV40-N的全序列信息: D2762 pRL-SV40-N-seq.txt
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2762-1μg | pRL-SV40-N(报告基因质粒) | 1μg |
D2762-100μg | pRL-SV40-N(报告基因质粒) | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pRL-SV40-N质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入感兴趣的5' -UTR、启动子、增强子等调控元件,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
4. pRL-SV40-N质粒或使用该质粒构建的新质粒转染细胞后,后续可以采用碧云天的海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒
(RG016/RG017)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)检测海肾荧光素酶的表达水平。
相关产品: