pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)萤光素酶报告基因检测的质粒。该报告基因质粒在pRL-SV40-N (D2762)的基础上进行了改造,使用了蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原Renilla luciferase进行了替换,其主要用于在其多克隆位点插入感兴趣的5'-UTR、启动子或增强子等调控元件以研究该调控序列的基因转录调控活性。可以使用BglII和多克隆位点切除SV40 early enhancer/promoter,以降低本底的转录,并插入感兴趣的5'-UTR等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。研究3'-UTR并希望使用Gaussia Luciferase萤光素酶时,推荐使用pGLuc-Dura-SV40-C (D2770)。
Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时,无需裂解细胞,可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。
Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比,使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势:分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;发光强度高,是其它萤光素酶的1000倍;反应无须ATP,不受ATP影响;稳定性高,对温度、pH值等耐受性强。
与野生型Gaussia Luciferase相比,突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时,不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点,还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。
pGLuc-Dura-SV40-N质粒含有SV40早期增强子和启动子,可以实现Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶在哺乳动物细胞内的高效表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pGLuc-Dura-SV40-N质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
SV40 early enhancer/promoter | 7-418 |
Multiple cloning site | 426-480 |
Chimeric intron | 546-682 |
T7 RNA polymerase transcription (-17 to +2) | 726-744 |
T7 RNA polymerase transcription initiation site | 743 |
Gluc (MT) reporter gene | 754-1311 |
SV40 late polyadenylation signal | 1352-1533 |
β-lactamase (Ampr) coding region | 1700-2560 |
pGLuc-Dura-SV40-N质粒(3386bp)的图谱如下:
pGLuc-Dura-SV40-N的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒).pdf
pGLuc-Dura-SV40-N中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGLuc-Dura-SV40-N)包括:
AatII | AfeI | AgeI | AleI | AscI | AsiSI | BaeI |
BbvCI | BclI | BlpI | BmgBI | Bpu10I | BsaAI | BsiWI |
BsmBI | BspEI | BspQI | BsrGI | BssHII | BstBI | BstEII |
BstXI | BstZ17I | Bsu36I | CspCI | DraIII | EcoNI | Esp3I |
FseI | KasI | NaeI | NarI | NdeI | NgoMIV | PacI |
PciI | PflFI | PflMI | PluTI | PmeI | PmlI | PpuMI |
PshAI | RsrII | SapI | SbfI | SfoI | SgrAI | SmaI |
SnaBI | SrfI | SwaI | TspMI | Tth111I | XcmI | XmaI |
ZraI |
pGLuc-Dura-SV40-N中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGLuc-Dura-SV40-N)包括:
Acc65I | G`GTAC,C | 54 | KpnI | G,GTAC`C | 54 |
AflIII | A`CRYG,T | 438 | MfeI | C`AATT,G | 1471 |
ApaI | G,GGCC`C | 479 | MluI | A`CGCG,T | 439 |
AseI | AT`TA,AT | 2312 | MscI | TGG|CCA | 847 |
AvaI | C`YCGR,G | 426 | NheI | G`CTAG,C | 744 |
AvrII | C`CTAG,G | 404 | NotI | GC`GGCC,GC | 1319 |
BamHI | G`GATC,C | 1564 | NruI | TCG|CGA | 859 |
BglII | A`GATC,T | 1 | PaeR7I | C`TCGA,G | 426 |
BmtI | G,CTAG`C | 744 | PsiI | TTA|TAA | 1442 |
BsaHI | GR`CG,YC | 1947 | PspOMI | G`GGCC,C | 474 |
BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 746 | PspXI | VC`TCGA,GB | 426 |
BsoBI | C`YCGR,G | 426 | PstI | C,TGCA`G | 518 |
BspDI | AT`CG,AT | 1557 | PvuII | CAG|CTG | 80 |
ClaI | AT`CG,AT | 1557 | SacI | G,AGCT`C | 437 |
EagI | C`GGCC,G | 1319 | SacII | CC,GC`GG | 883 |
EarI | CTCTTCN`NNN, | 1688 | SexAI | A`CCWGG,T | 171 |
Eco53kI | GAG|CTC | 434 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 354 |
EcoO109I | RG`GNC,CY | 475 | SpeI | A`CTAG,T | 469 |
EcoRI | G`AATT,C | 451 | SspI | AAT|ATT | 1682 |
EcoRV | GAT|ATC | 459 | StuI | AGG|CCT | 403 |
HaeII | R,GCGC`Y | 3131 | XbaI | T`CTAG,A | 1312 |
HindIII | A`AGCT,T | 445 | XhoI | C`TCGA,G | 427 |
HpaI | GTT|AAC | 1462 |
pGLuc-Dura-SV40-N质粒可使用的测序引物序列如下:
T7 Primer (726-744): TAATACGACTCACTATAGG
pGLuc-Dura-SV40-N的全序列信息:D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒).txt。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2764-1µg | pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) | 1μg |
D2764-100µg | pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。