碧云天的BeyoMag™磁珠法mRNA纯化试剂盒(BeyoMag™ mRNA Purification Kit with Magnetic Beads)是一种使用Oligo (dT)25包被的磁珠，配合优化的缓冲体系，用于稳定、高效、便捷地从总RNA中快速分离纯化出高纯度完整mRNA的试剂盒。
本试剂盒纯化的mRNA可直接应用于RT-PCR、qPCR、高通量测序、mRNA文库的构建、固相cDNA文库构建、Northern blot分析、RACE等分子生物学实验，还可用于mRNA疫苗的研发等[1-2]。
一个典型的哺乳动物细胞中，四种主要的大分子的质量和占比为：RNA, ∼20pg (1%); DNA, ~7pg (0.3%); protein, ∼500pg (20%); polysaccharide (多糖), ∼2μg (78.7%)。信使RNA (messenger RNA, 简称mRNA) 约占总RNA质量的4%，核糖体RNA (ribosomal RNA, 简称rRNA)约占80% [3]。
本试剂盒的原理和主要操作流程如图1所示。BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠表面共价修饰了25聚dT序列即Oligo (dT)25，当真核细胞、动植物组织抽提的总RNA与BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠混合后，磁珠表面的寡聚dT序列与mRNA 3'端的poly(A)进行碱基配对而特异性结合，然后在外界磁场的作用下，磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离，经洗涤充分去除杂质，最后用洗脱液将mRNA从磁珠上洗脱下来，即可获得高纯度完整mRNA[4-5]。
图1.BeyoMag™磁珠法mRNA纯化剂盒(R0071)的工作原理示意图。
本试剂盒具有提取效果稳定、纯度高、速度快、操作便捷等优点。本试剂盒的mRNA提取体系经过反复测试和优化，能分离纯化获得总RNA中90%以上的mRNA。仅需孵育、洗涤、洗脱等简单的操作，整个纯化过程不超过15分钟即可完成。所有操作都在同一个离心管中完成，操作便捷。细胞中提取的total RNA使用本产品进行mRNA的纯化效果参考图2。
图2.BeyoMag™磁珠法mRNA纯化试剂盒(R0071)用于从总RNA纯化mRNA的效果图。使用RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024)抽提293T细胞的总RNA，再使用本产品进行mRNA的纯化，然后使用BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit (D7268)进行qRT-PCR检测，使用Actin、B2M和GAPDH三种内参引物对比总RNA (Total RNA)和纯化的mRNA的Ct值。图中可见mRNA纯化前后的Ct值基本一致，说明mRNA的纯化效果接近100%。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒中的BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠粒径约为200nm，浓度约为5mg/ml。每毫克磁珠偶联的Oligo (dT)25约为300-400pmol，每毫克磁珠可纯化约2-3µg mRNA。
对于常规的mRNA纯化，按照每个样品使用20μl磁珠悬浊液，本试剂盒小包装可用于50次mRNA纯化，中包装可用于200次mRNA纯化，大包装可用于800次mRNA纯化。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0071S-1 | BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠 | 1ml |
| R0071S-2 | 溶液I (结合液) | 30ml |
| R0071S-3 | 溶液II (洗涤液) | 25ml |
| R0071S-4 | 溶液Ⅲ (洗脱液) | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0071M-1 | BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠 | 4ml |
| R0071M-2 | 溶液I (结合液) | 120ml |
| R0071M-3 | 溶液II (洗涤液) | 100ml |
| R0071M-4 | 溶液Ⅲ (洗脱液) | 8ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0071L-1 | BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠 | 16ml |
| R0071L-2 | 溶液I (结合液) | 480ml |
| R0071L-3 | 溶液II (洗涤液) | 400ml |
| R0071L-4 | 溶液Ⅲ (洗脱液) | 32ml |
| — | 说明书 | 1份 |
4℃保存，一年有效。其中BeyoMag™ Oligo (dT)25磁珠长期不使用时，可以-20℃保存，-20℃可以保存更长时间。
注意事项：操作过程要严格保证无RNA酶和DNA酶污染。对于操作环境中RNase的去除，推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。
本产品的所用试剂和耗材都要求是RNase-free和DNase-free的，操作时应小心，避免被污染。如果耗材可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。如果可能有DNase污染，通常高温高压灭菌可以使DNase灭活。
需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的BeyoMag™磁分离架系列产品(FMS004、FMS008、FMS012、FMS016或FMS024)。
分装或使用磁珠时，请适当涡旋震荡或反复颠倒以确保磁珠充分混匀。
磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。
请使用推荐的总RNA量。如果总RNA量过大，可能造成磁珠聚集，会影响洗涤进而影响提取获得的mRNA纯度。发生磁珠聚集时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可有效改善提取效果。如果发生磁珠聚集现象，建议在后续实验中适当减少总RNA量。
由于RNA容易降解，提取获得的mRNA推荐尽快用于RT-PCR等后续实验。如果不能尽快使用，需要-80℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Total RNA | Beads required | Solution I for Wash |
| 1~10µg | 20µl | 200µl each time |
| 10~30µg | 40µl | 200µl each time |
| 30-50µg | 100µl | 200µl each time |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0071S | BeyoMag™磁珠法mRNA纯化试剂盒 | 50次 |
| R0071M | BeyoMag™磁珠法mRNA纯化试剂盒 | 200次 |
| R0071L | BeyoMag™磁珠法mRNA纯化试剂盒 | 800次 |
| R0073S | BeyoMag™磁珠法动物mRNA抽提试剂盒 | 50次 |
| R0073M | BeyoMag™磁珠法动物mRNA抽提试剂盒 | 200次 |
| R0073L | RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 800次 |
| R0075-1ml | BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads (mRNA磁珠) | 1ml |
| R0075-5ml | BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads (mRNA磁珠) | 5ml |
| R0075-20ml | BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads (mRNA磁珠) | 20ml |
| R0075-100ml | BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads (mRNA磁珠) | 100ml |
| R0077S | BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提试剂盒 | 10次 |
| R0077M | BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提试剂盒 | 50次 |
| R0077L | BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提试剂盒 | 200次 |
| R0081-1ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 1ml |
| R0081-5ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 5ml |
| R0081-20ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 20ml |
| R0081-100ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 100ml |
