RNA/蛋白抽提试剂盒
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产品编号 R0018S
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¥ 228.00
产品包装:
25次 100次
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碧云天生产的RNA/蛋白抽提试剂盒(RNA/Protein Isolation Kit),也称RNA/蛋白共抽提试剂盒(RNA/Protein Co-isolation Kit)或RNA/蛋白共提取试剂盒(RNA/Protein Co-extraction Kit),是一种简单、方便、快速地从培养的动物细胞或组织、植物、酵母、细菌或病毒等单个样品中分步分别提取RNA和蛋白质的试剂盒。本试剂盒特别适合用于比较珍贵的样品,可以实现一个样品同时用于RNA和蛋白质的抽提。本试剂盒不仅适用于少量样品的提取,还可用于大量不同样品的同时处理,特别适合同一个样品中RNA和蛋白质后续的同步检测。

本试剂盒操作简单,使用便捷。本试剂盒操作简单快速,仅需约1小时即可完成RNA和蛋白质的提取。本试剂盒基于特殊裂解液多组分分离的原理,分步提取同一个样品的RNA和蛋白质。在样品中加入裂解液后进行裂解或匀浆,使细胞或组织充分裂解,加入氯仿混匀并离心后分为三层,包括上层无色水相(含RNA),中间相(含DNA和蛋白质)和下层红色有机相(含DNA和蛋白质)。RNA溶于水相中,取出水相后用异丙醇沉淀即可获得纯化的RNA;用无水乙醇沉淀中间相和下层红色有机相的DNA,并进一步用异丙醇沉淀有机相,可获得纯化的蛋白质。这些沉淀通过洗涤去除其它杂质成分后可用于后续的实验[1-2]。

本试剂盒采用高品质抽提试剂。本试剂盒提供的特殊裂解液可以有效抑制RNA的降解,保持样品中RNA的完整性;既可用于小量样品(例如5-100mg组织或20-500万个细胞),也适用于大量样品(例如大于1g的组织或超过一千万的细胞)。通常,每一百万细胞可抽提得到5-15μg RNA,每毫克组织可抽提得到1-10μg RNA。

本试剂盒抽提所得的RNA和蛋白质纯度高,用途广泛。抽提所得的总RNA无蛋白、DNA污染,溶于DEPC水或不含RNase的超纯水后的A260/280值为1.8-2.0,可直接用于RT-PCR、cDNA克隆、纯化mRNA、Northern blot、Dot blot、体外翻译、以及RNase protection assay等实验,也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(High-throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的实验;提取的蛋白可用于SDS-PAGE、Western blot、免疫沉淀等分析。

本试剂盒小包装和中包装分别可以抽提25个或100个6孔板中的细胞样品或10-80mg的组织样品。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R0018S-1 裂解液 25ml
R0018S-2 洗涤液I 22ml (第一次使用前需加入44ml无水乙醇)
R0018S-3 洗涤液II 7.5ml (第一次使用前需加入112.5ml无水乙醇)
R0018S-4 蛋白溶解液 5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R0018M-1 裂解液 100ml
R0018M-2 洗涤液I 88ml (第一次使用前需加入176ml无水乙醇)
R0018M-3 洗涤液II 30ml (第一次使用前需加入450ml无水乙醇)
R0018M-4 蛋白溶解液 20ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,一年有效。

注意事项:

用户需自备无水异丙醇、氯仿、无水乙醇、DEPC水(R0021/ST036)或BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。

使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量裂解液,并裂解样品后冻存。

必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品呼气或说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。

裂解液含有毒物质,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触裂解液,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.准备工作:
洗涤液I、洗涤液II第一次使用前需分别加入相应的无水乙醇。
2.样品的裂解:
a.细胞裂解或组织匀浆。
(a)贴壁细胞。
吸尽培养液,每10cm2细胞加入1ml裂解液。一般6孔板每孔加1ml裂解液,12孔板每孔加0.5ml裂解液。晃动3-5下,再用枪吹打2-3下,确保全部裂解,然后吸至离心管中。
(b)悬浮细胞。
离心收集细胞,吸尽液体,每500-1000万动植物或酵母细胞,或1000万细菌,加入1ml裂解液。用枪吹打或适当Vortex,确保全部裂解。注:某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,以确保全部裂解。
(c)组织。
先将组织剪切成小块,放入普通玻璃匀浆器内。每50-80mg组织加入1ml裂解液,匀浆。对于RNA完整性要求比较高的情况,推荐先液氮冷冻组织块,然后在低温下用研钵研碎组织,随后再加入裂解液进行总RNA抽提。
b.对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织,裂解液裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000×g在4℃离心10分钟,然后吸取澄清的裂解液裂解产物至一新的离心管中。
c.室温孵育5分钟,使样品充分裂解。
d.按每毫升裂解液加入0.2ml氯仿,Vortex混匀或猛烈晃动15秒,室温孵育2-3分钟。
e.12,000×g在4℃离心15分钟。此时可见分层,分别为无色水相(上层),中间层和红色有机相(下层)。其中上层无色水相用于RNA的提取(步骤3),中间层和下层红色有机相用于蛋白质的提取(步骤4)。
3.RNA的提取:
a.吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中,每毫升最初的裂解液约可吸取0.5-0.55ml。注:不要吸到中间层和红色有机相(下层)。如果要分离蛋白质可保留这两部分,4℃可存放过夜。
b.按每毫升最初的裂解液加入0.5ml无水异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10分钟。如果希望提取microRNA等小RNA,推荐-80℃沉淀过夜。
c.12,000×g在4℃离心10分钟,在管底可见RNA沉淀,弃上清。
d.每毫升最初的裂解液加入1ml洗涤液I,Vortex或颠倒混匀。
e.7,500×g在4℃离心5分钟,弃上清。再用离心机瞬时离心(>5,000×g),小心吸尽液体。
f.待RNA略干后,加入20-50μl DEPC水(R0021/R0022)或BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)溶解,-80℃冻存。注:切勿让RNA过分干燥,否则将极难溶解,且测出的A260/280值会低于1.6。
4.蛋白的提取:
a.接RNA提取步骤3a,尽可能去除上层的水相后,保留中间相和红色有机相(下层)。
b.按每毫升最初的裂解液加入0.3ml无水乙醇,颠倒数次混匀。室温孵育2-3分钟。
c.2,000×g在4℃离心5分钟,吸取上清至一新的离心管中。
d.按每毫升最初的裂解液加入1.5ml无水异丙醇的量,在上清中加入适量无水异丙醇,室温孵育10分钟。
e.12,000×g在4℃离心10分钟,弃上清。
f.用洗涤液II洗涤蛋白质沉淀。每毫升最初的裂解液加入1ml洗涤液II,室温孵育20分钟。蛋白质在洗涤液II中,4℃可保存一个月,-20℃可保存一年。
g.7500×g在4℃离心5分钟,弃上清。
h.重复步骤4f-g 2-3次。
i.按每毫升最初的裂解液加入1.5-2ml无水乙醇,Vortex混匀。室温孵育20分钟。
j.7500×g在4℃离心5分钟,弃上清。
k.室温放置晾干蛋白质沉淀5-10分钟,用200μl蛋白溶解液溶解蛋白质,反复吸打,可用50℃温浴使其完全溶解。
l.10,000×g在4℃离心10分钟去除不溶物。
m.分离得到的蛋白质样品可用于下游实验或-20℃保存备用。
常见问题:
Problem Possible Causes
RNA 产量低 样品未完全裂解。
提取的RNA沉淀没有完全溶解。
A260/A280 Ratio <1.65 样品量过少。
无色水相(上层)可能被中间层污染。
降解 提取的RNA沉淀没有完全溶解。
获取组织后,未立即处理或进行冷冻。
细胞可能被胰蛋白酶过度消化。
耗材或操作环境中可能含RNase。
DNA污染 用于样品均质化的裂解液过少。
样品可能含有有机溶剂(乙醇、DMSO)、强缓冲液或碱性溶液。
蛋白 产量低 样品未完全裂解。
提取的蛋白沉淀没有完全溶解。
降解 获取组织后,未立即处理或进行冷冻。
PAGE条带变形 蛋白质沉淀未充分洗涤。
参考文献:
1.Jiang J, Ma J, Liu B, Wang Y. Viruses. 2019. 11(4):324.
2.Thorn CE, Bergesch C, Joyce A, Sambrano G, et al. Mol Ecol Resour. 2019. 19(2):439-455.
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产品编号 产品名称 包装
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