碧云天生产的EHA101根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用)，EHA101 agrobacterium tumefaciens glycerol stock for construction of transgenic plant是收集生长在对数期的EHA101根瘤农杆菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。本甘油菌可以直接划平板或小量、大量培养，常用于转基因植物用菌株的构建。本菌株适用于水稻(rice)、烟草(tobacco)、玉米(maize)等植物的转基因操作。

EHA101根瘤农杆菌菌株为C58型背景，核基因中含有利福平抗性基因RIF，可作为该菌株的筛选标记。为了便于转化操作，此菌株携带无自身转运功能的胭脂碱(Nopaline)型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有VIR基因 (VIR基因是T-DNA转移入植物基因组必需的元件，pEHA101质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101型Ti 质粒含有筛选标签Kan，使EHA101根瘤农杆菌菌株具有卡那霉素抗性。

EHA101根瘤农杆菌菌株基因型：C58 (rif^R) Ti pEHA101根瘤 (pTiBo542DT-DNA) (kan^R) Nopaline。

本菌株可以使用常规的LB培养基或YEB培养基进行培养。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择，可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/strain.htm

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0394	EHA101根瘤农杆菌甘油菌	200μl
－	说明书	1份

保存条件：

-80℃保存，至少2年有效。须注意避免反复冻融。

注意事项：

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.划平板接种：
取出甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头，蘸取少量甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB平板接近平行的角度，在含34μg/ml利福平和50μg/ml卡那霉素的LB或YEB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200µl塑料枪头，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB或YEB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。28-30℃，倒置培养2-3天。
b.用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量甘油菌，在含34μg/ml利福平和50μg/ml卡那霉素的LB或YEB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB或YEB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。28-30℃，倒置培养2-3天。
2.直接培养
取出甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3毫升LB(34μg/ml利福平和50μg/ml卡那霉素)的细菌培养试管内或装有100毫升或更大体积LB(34μg/ml利福平和50μg/ml链霉素)的细菌培养瓶内。28-30℃，200rpm培养至少24h。
3.感受态细菌的制备
可以使用碧云天的农杆菌感受态制备试剂盒(D0303)进行感受态细胞的制备。
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D0301	一步法感受态细菌制备试剂盒	200次
D0302	超级感受态细菌制备试剂盒	100次
D0303	农杆菌感受态制备试剂盒	100次
D0332	2-T1甘油菌	200µl
D0337	BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株)	200µl
D0339	BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白诱导表达用)	200µl
D0346	DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株)	200µl
D0351	DH5α甘油菌	200µl
D0360	JM109甘油菌	200µl
D0361	JM110甘油菌(Dam和Dcm甲基化缺陷菌株)	200µl
D0371	Rosetta(DE3)甘油菌(密码子兼容的蛋白诱导表达)	200µl
D0378	Stbl3甘油菌(慢病毒等逆转录病毒载体扩增用)	200µl
D0389	TG1甘油菌	200µl
D0390	TOP10甘油菌	200µl
D0391	细菌冻存液	50ml
D0392	GV3101根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用)	200μl
D0393	LBA4404根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用)	200µl
D0394	EHA101根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用)	200µl