BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株)
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产品编号 D0337
数量
¥ 109.00
产品包装:
200μl
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碧云天生产的BL21(DE3)甘油菌,是收集生长在对数期的BL21(DE3)菌,加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒。

BL21缺失细胞质中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease),能有效避免重组表达蛋白的降解,所以被广泛用作外源蛋白的表达菌株。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株,在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达,因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子(T7 promoter)调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的,因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。

BL21(DE3)菌株基因型:F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm (DE3)

BL21(DE3)菌株核酸酶表达水平较高,在利用其进行被转化质粒提取时,为充分避免核酸酶的影响,可使用碧云天生产的质粒小量抽提试剂盒(通用型) (D0007SD0007M)、质粒中量抽提试剂盒(通用型) (D0020)质粒大量抽提试剂盒(通用型) (D0028)进行质粒抽提。

本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择,可参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/strain.htm

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0337 BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株) 200μl
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少3个月有效。-80℃可以长期保存。

注意事项:

使用本甘油菌时可以不必完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下,菌体会逐渐沉淀至管底,请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.划平板接种:
取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上,并置于超净台内,后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作:镊子的顶端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精灯上略略烧一下,使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头,蘸取少量BL21(DE3)甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料枪头,以尽量和LB平板接近平行的角度,在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动,再用一无菌的200µl塑料枪头,在原先的划线上以90º或120º角,再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作:将接种环在酒精灯上略略烧一下,使接种环处于无菌状态。微冷后,蘸取少量BL21(DE3)甘油菌,在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下,微冷后,在原先的划线上以90º或120º角,再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养:
BL21(DE3)甘油菌置于冰上,并置于超净台内,后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精灯上略略烧一下,使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签,蘸取少量BL21(DE3)甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml LB的细菌培养试管内或装有100ml或更大体积LB的细菌培养瓶内。37℃,约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备
可以使用碧云天的一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)或其它方法进行感受态细胞
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使用本产品的文献:
1. Zhang Y, Zhang P, He A, Yang Y, Wang J, Zhang H, Zhang W.
ONCOTARGET . 2017 Jun 13;8(24):39077-39086. (IF 5.168)
2. Zhu YH,Liu CY,Cai S,Guo LB,Kim IW,Kalia VC,Lee JK,Zhang YW
Indian J Microbiol. 59(2):225-233. (IF 1.83)