DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株)
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产品编号 D0346
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¥ 339.00
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200μl
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碧云天生产的DH10Bac甘油菌,是收集生长在对数期的DH10Bac菌,加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。

DH10Bac是昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中常用的同源重组大肠杆菌菌株。该菌株含有杆状病毒穿梭载体(baculovirus shuttle vector) bMON14272(俗称bacmid,其含有一个转座反应必须的mini-attTn7重组位点)和一个辅助质粒pMON7124(用于表达转座所需的转座蛋白)。DH10Bac主要用作pFastBac等类似载体转化的宿主菌株。当pFastBac重组质粒转化进入DH10Bac细胞后,pFastBac载体上的mini-Tn7位点和DH10Bac宿主菌中bacmid上的mini-attTn7位点之间发生转座(transposition),产生重组的bacmid。重组的bacmid在转染昆虫细胞后可产生含有重组子的杆状病毒,后者进一步感染昆虫细胞后即可启动外源重组蛋白的表达。

DH10Bac宿主包含的bacmid bMON14272含小型F复制子,卡那霉素抗性基因,mini-attTn7位点和lacZα互补因子(可通过蓝白斑筛选);辅助质粒pMON7124包含四环素抗性和tnsABCD区域,该区域表达转座反应所需的转座蛋白。携带T7转座原件(Tn7 element)的供体质粒pFastBac (donor pFastBac plasmid)带有庆大霉素抗性基因,杆状病毒多角体启动子,多克隆位点区域和SV40的多腺苷酸化信号。

使用碧云天超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)制备DH10Bac感受态细胞,转化在多克隆位点插入目的基因的pFastBac重组质粒产生重组的bacmid,利用碧云天生产的杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒(D0031)提取重组bacmid DNA,将重组bacmid DNA转染进入昆虫细胞(推荐使用碧云天生产的LipoInsect™昆虫细胞转染试剂C0551)产生重组杆状病毒,扩增重组的杆状病毒并用其感染昆虫细胞,就可以大规模表达重组目的蛋白。

DH10Bac菌株具有卡那霉素抗性和四环素抗性,pFastBac质粒具有庆大霉素(Gentimicin)抗性和氨苄青霉素抗性。

DH10Bac菌株基因型:F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG / pMON14272 / pMON7124。

重组后的克隆用蓝白斑进行筛选,重组成功的克隆在含有卡那霉素和四环素抗性的IPTG/X-Gal LB平板上呈现为白色菌落。

本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择,可参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/strain.htm

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0346 DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株) 200μl
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。-80℃可以长期保存。

注意事项:

使用本甘油菌时可以不必完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下,菌体会逐渐沉淀至管底,请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 划平板接种:
取出DH10Bac甘油菌置于冰上,并置于超净台内,后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作:镊子的顶端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精灯上略略烧一下,使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200微升塑料枪头,蘸取少量DH10Bac甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料枪头,以尽量和LB平板接近平行的角度,在卡那霉素(100μg/ml)和四环素(10μg/ml)的LB平板上连续作S形或Z形划动,再用一无菌的200微升塑料枪头,在原先的划线上以90或120度角,再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作:将接种环在酒精灯上略略烧一下,使接种环处于无菌状态。微冷后,蘸取少量DH10Bac甘油菌,在含有卡那霉素(100μg/ml)和四环素(10μg/ml)抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下,微冷后,在原先的划线上以90°或120°角,再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养:
取出DH10Bac甘油菌置于冰上,并置于超净台内,后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精灯上略略烧一下,使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签,蘸取少量DH10Bac甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有含有卡那霉素(100μg/ml)和四环素(10μg/ml)的3ml LB的细菌培养试管内或装有100毫升或更大体积LB的细菌培养瓶内。37℃,约200rpm培养过夜。
3.DH10Bac感受态细菌的制备
可以使用碧云天的一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)或其它方法进行感受态细菌的制备。
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