碧云天生产的新型冠状病毒(2019-nCoV) N基因假病毒(Novel Coronavirus (2019-nCoV) N Gene Pseudovirus),是含有新型冠状病毒N基因的慢病毒(Lentivirus),该病毒由RNA和外壳蛋白组成,但无致病性,只需符合常规慢病毒操作要求的实验室即可使用,可用于N基因的细胞功能实验,也可作为阳性对照或质控用于新型冠状病毒的RNA抽提、qRT-PCR检测,各种相关试剂盒的模拟测试、性能评价等用途。
本假病毒全称为Lenti-EF1α-2019-nCOV-N-Flag/His-CMV-Puro,启动子为EF1α和CMV,C端蛋白标签为Flag和6×His,筛选抗性为Puromycin。
2019年底由新型冠状病毒引起的肺炎疫情,从2020年初开始在全球大流行,感染病例快速上升,引发全球关注。该病毒被世界卫生组织(WHO)命名为2019-nCoV,被国际病毒分类委员会命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。由新型冠状病毒导致的疾病,被世界卫生组织正式命名为冠状病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19),通常称为新型冠状病毒肺炎,简称“新冠肺炎”。
新型冠状病毒(2019-nCoV)属于单正链的RNA病毒,与SARS-CoV以及MERS-CoV具有较高的同源性。新型冠状病毒的基因组包含11个基因,其中功能较为重要的5个基因分别是:ORF1ab基因、S基因、E基因、M基因、N基因。本假病毒将新型冠状病毒的N基因序列(Gene ID: 43740575,Protein_Id为YP_009724397.2)合成并克隆构建至慢病毒载体,在293T细胞内进行假病毒的制备,所获得的假病毒包含N基因1260碱基的RNA序列。N基因编码的N蛋白是一种核衣壳碱性磷酸化蛋白(nucleocapsid phosphoprotein),位于病毒颗粒的核心部分,N蛋白首先是与基因组RNA在胞浆中结合形成螺旋卷曲的核衣壳,并与M、E蛋白相互作用后包裹进入病毒衣壳内,S蛋白在病毒膜出芽成熟时插入,并与M蛋白相用后形成病毒体从囊泡中释放。N蛋白在病毒的包装、复制和蛋白质翻译等过程中起关键作用。作为一种高度保守的抗原蛋白,N蛋白可用于特异性识别患者样本中的病毒靶点抗原,所以N基因和N蛋白常作为冠状病毒的检测诊断工具,而新型冠状病毒(2019-nCoV) N基因假病毒更广泛用于RNA抽提、qRT-PCR检测的阳性对照或阳性质控品,也是各种相关试剂盒的模拟测试、性能评价的有力工具。
本假病毒的病毒滴度≥1×108IU (Infection Unit)/ml,即每毫升病毒液中至少含有1×108个具有生物活性的病毒颗粒。滴度检测采用整合数法,即病毒感染HEK293细胞后,提取HEK293细胞的基因组DNA,以慢病毒载体上的通用引物进行qPCR获得病毒整合拷贝数。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C3021-100µl | 新型冠状病毒(2019-nCoV)N基因假病毒(108IU/ml) | 100µl |
C3021-1ml | 新型冠状病毒(2019-nCoV)N基因假病毒(108IU/ml) | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-80℃保存,一年有效。
注意事项:本产品使用前请仔细阅读附录1《慢病毒使用安全规范》。虽然本假病毒使用的是较安全的慢病毒载体,没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults),但在使用本假病毒时仍需在生物安全等级Biosafety Level 2 (BSL-2)或更高标准的经认证的II级生物安全柜中进行。
反复冻融会降低病毒滴度,如有必要请在收到本产品后分装保存。病毒融解后,如果在一周内使用,可以放置于4℃。如果-80℃保存时间超过一年,可能会导致滴度下降,此时建议重新测定病毒滴度。
本假病毒对不同细胞的感染效率或感染复数(multiplicity of infection, MOI)存在差异,建议通过预实验确定感染效率或MOI。
如有需要可以使用TE (Tris-EDTA缓冲液) (ST725)对本产品进行稀释。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。